脱氢奎尼酸生物合成途径关键酶基因的克隆表达

摘要

实验分别以pG908质粒和E.coliW3110染色体为模板,PCR扩增得到了抗反馈抑制的aroG基因和aroB基因,并克隆于pGEMT-easy载体中,序列测定结果与文献报道一致,酶切鉴定结果与预期目的也一致.从该克隆重组质粒上切下aroG基因分别连入pKK223表达载体和高效表达载体pBV220上,只在pBV220中实现了基因的高效表达,表达产物具有DAS酶活性.aroB基因以同样方式克隆于pBV220载体的相应位置,未获得明显表达,经过对该重组子的改造,获得了脱氢奎尼酸合成酶(DQS)基因的高效表达.在寻找到两个基因共同的高效表达载体的基础上,我们构建了含一个启动子PRPL和两个启动子PRPL,PL及两基因不同位置串联重组子共4个,有三个重组子在SDS-PAGE上约35kD-38kD处,表达出一条新增蛋白带.总之,我们成功地实现了脱氢奎尼酸生物代谢途径关键酶基因的克隆表达,并初步构建了共表达重组子,为脱氢奎尼酸和奎尼酸的生物合成奠定了基础.