脱氢奎尼酸合成酶基因aroB在大肠杆菌中的克隆表达及酶活力测定

摘要

目的:在大肠杆菌中高效表达脱氢奎尼酸合成酶。方法:以大肠杆菌基因组为模板,采用PCR扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB,并在大肠杆菌中进行表达。结果:在浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后aroB基因表达量占菌体总可溶性蛋白40.0%,SDS-PAGE显示重组菌诱导后表达的脱氢奎尼酸合成酶蛋白分子量约为38 kDa,发酵液中脱氢奎尼酸合成酶的酶活力达到178 U/L,为宿主菌的35.6倍。结论:脱氢奎尼酸合成酶在大肠杆菌中实现了高效表达。