表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人胃癌细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

摘要

目的
　　 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养人胃癌细胞系SGC7901增殖抑制作用及诱导凋亡作用,并初步探讨EGCG诱导SGC7901细胞凋亡的分子机制。
　　 方法:
　　 (1)应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对SGC7901细胞生长曲线的影响；
　　 (2)采用平皿克隆形成实验法测定不同剂量EGCG对SGC7901细胞锚定依赖性生长能力的影响；
　　 (3)吖啶橙／溴化乙啶(AO／EB)荧光双染法观察各组细胞凋亡形态,计算凋亡率；
　　 (4)WesterBlot法检测不同剂量EGCG处理人胃癌细胞(SGC7901)前后NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化情况。
　　 结果:
　　 (1)细胞计数结果表明:40-120μg／ml浓度的EGCG与对照组相比均可抑制SGC-7901细胞生长,且成浓度和时间依赖性。连续计数4天,常规培养的SGC-7901细胞群体倍增时间为34.50小时；40μg／ml的EGCG可使SGC-7901细胞群体倍增时间延长至35.99小时,当EGCG为120μg／ml时则可使其延长至94.74小时,表明SGC-7901细胞经EGCG作用后,其细胞群体倍增时间明显延长,细胞增殖周期延长,从而细胞增殖速度减慢。
　　 (2)平皿克隆形成实验法显示:不同浓度EGCG处理人胃癌细胞(SGC-7901),表现细胞增殖抑制,呈剂量依赖性。EGCG对SGC-7901细胞IC50值为63.5μg／ml。
　　 (3)吖啶橙／溴化乙啶(AO／EB)结果显示:当EGCG浓度为40μg／ml时,SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡的形态学改变,随着EGCG的浓度高至100μg／ml时,可见已经破碎的核和凋亡小体形成。EGCG(0μg／ml、40μg／ml、60μg／ml、80μg／ml、100μg／ml、120μg／ml)处理SGC-7901细胞48小时,凋亡率分别5.4±0.12％、8.35±0.17％、31.11±0.42％、44.46±0.82％、66.5±0.62％、75.5±0.41％(P<0.05VScontrol)。说明EGCG可以诱导SGC-7901细胞凋亡,且随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加。
　　 (4)WesterBlot显示随着药物浓度升高,EGCG可以逐渐下调NF-κB和Bcl-2的蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达。
　　 结论:
　　 (1)EGCG对人胃癌细胞(SGC-7901)有较强增殖抑制作用,其细胞群体倍增时间明显延长,细胞增殖周期延长；
　　 (2)不同浓度EGCG处理人胃癌细胞(SGC-7901),表现为细胞增殖抑制,呈剂量依赖性；
　　 (3)EGCG可以诱导SGC-7901细胞凋亡,且随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加；
　　 (4)EGCG具有诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制核转录因子NF-κB活化,导致Bax／Bcl-2比值的上调,促进Caspase-3的活化有关。