过继转输TSA诱导的CD4+CD25+调节性T细胞对复发性流产治疗的实验动物研究

摘要

目的：在正常生理妊娠过程中，胎儿不被母体免疫排斥，事实上反映了母体对胚胎的免疫耐受作用。本研究通过过继转输最佳浓度TSA诱导的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)，分析孕鼠母体调节性T细胞的比例变化与胚胎丢失之间的关系，探讨过继转输最佳浓度TSA诱导的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对胚胎丢失孕鼠母胎免疫耐受的诱导作用，为进一步研究反复自然流产(RecurrentSpontaneousAbortion，RSA)的免疫学发病机制及下一步指导临床合理规范的进行过继免疫治疗提供理论基础和实验依据。
　　 方法：采用雌性CBA/J×雄性DBA/2J作为自然流产模型，采用雌性CBA/J×雄性BALB/c作为正常妊娠模型，使用免疫磁珠方法分选雌性CBA/J小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞，并使用流式细胞术检测分选细胞的纯度。采用TSA对流产孕鼠外周CD4+/CD25-T细胞Foxp3基因特定位点进行表观遗传修饰，以实现Foxp3稳定、持久的表达，并将修饰后最佳浓度的CD4+CD25+Treg分别过继转输至流产模型妊娠第4d的雌性CBA/J孕鼠（与雄鼠DBA/2J交配），于妊娠第14天分别处死各组CBA/J孕鼠，测量胎盘体积、计数吸收胚胎数和存活胚胎数，并计算胚胎吸收率。
　　 结果：1）TSA与CD4+CD25+Treg共同作用后，明显提高CD4+CD25+Treg的比例，且随着TSA浓度的逐步增加，CD4+CD25+Treg比例逐步增加，其中TSA浓度为5μmol/L时，CD4+CD25+Treg的比例达55.14％±0.31％，诱导率最高。组间比较，除浓度为0.1μnol/L组与对照组比较无显著性差异，其余各浓度与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。2)在流产模型中，CBA/J孕鼠的胚胎吸收率为29.88％±5.38％正常妊娠模型中，CBA/J孕鼠的胚胎吸收率为12.00％±3.17％，两组比较有显著性差异(P＜0.05)。在自然流产模型中，尾静脉注射PBS调节的未经TSA诱导的CD4+CD25+Treg细胞，CBA/J孕鼠的胚胎吸收率为28.38％±3.63％，而尾静脉注射经过TSA诱导的最佳浓度的CD4+CD25+Treg细胞，CBA/J孕鼠的胚胎吸收率下降至12.63％±3.50％，与未经TSA诱导组比较有显著性差异(P＜0.05)，但与正常妊娠模型相比无显著性差异(P＞0.05)。
　　 结论：1)在正常妊娠过程中，CD4+CD25+调节性T细胞发挥了极其重要的免疫耐受维持的作用，免疫耐受的缺失或不足是妊娠丢失的重要机制之一。2）怀孕早期过继转输最佳浓度TSA诱导的CD4+CD25+Treg细胞的方法，能诱导母胎免疫耐受，显著改善自然流产模型的妊娠结局，有利于妊娠的维持。