过继转输CD4+CD25+调节性T细胞对博来霉素诱导小鼠肺纤维化病程的影响及药物干预

摘要

文章从以下两方面就过继转输CD4+CD25+调节性T细胞对博来霉素诱导小鼠肺纤维化病程的影响及药物干预进行了综述。
　　第一部分来源于PF小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞对博来霉素诱导小鼠PF病程的影响
　　前期的研究结果表明,CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,Tregs)与博来霉素诱导的小鼠肺纤维化(PF)的病程存在重要的相关性,因此,进一步研究了过继转输来源于PF小鼠外周血的淋巴细胞或Tregs对小鼠PF病程的影响。
　　目的:探讨来源于PF小鼠的外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes, PBL)和Tregs对博来霉素诱导的小鼠PF病程的影响,进一步证实Tregs在PF病程中的作用。
　　一、预防性过继转输PF小鼠的外周血Tregs对博来霉素诱导小鼠PF病程的影响
　　方法:采用气管内灌注博来霉素(BLM),建立小鼠PF模型。造模14d后,采用密度梯度离心和流式分选法,分别获取 PF小鼠外周血中的淋巴细胞和Tregs。采用尾静脉注射法,将获得的淋巴细胞或Tregs过继转输给正常小鼠,并于第2d将过继转输后的小鼠气管内灌注生理盐水或BLM,于造模后的7、14、21和28d分批处死小鼠。采用HE染色和肺HYP含量测定评价PF变化程度。采用流式细胞术检测过继转输PBL后的小鼠(分为NS组和BLM组)外周血、胸腺中Tregs的比例(CD4+CD25+T细胞/CD4+T细胞)变化。
　　结果:①过继转输PBL对NS组肺病理学及HYP含量无明显影响,仅见少量炎性细胞浸润。②过继转输PBL的BLM组肺7d可见炎性细胞浸润,14d渗出较明显,21d肺泡结构开始受损、胶原沉积,28d胶原增加、肺泡结构受损;肺HYP含量7d、28d较未过继转输的BLM组明显下降。③过继转输Tregs对NS组肺病理学及HYP含量无明显影响,仅见少量炎性细胞浸润。④过继转输Tregs的BLM组肺7d少量炎性细胞浸润,14d炎性细胞浸润明显,21d胶原沉积,28d时部分肺泡受损、胶原沉积增多。肺HYP含量7d、21d较未过继转输的BLM组明显下降。⑤外周血中Tregs的比例,14～28d BLM组均高于NS组。⑥胸腺中Tregs的比例,7～28d BLM组均高于NS组。
　　小结:①BLM诱导小鼠PF模型,3至7天处于急性炎症期,14至21天处于炎症和纤维化交界期,以炎症为主;28天基本处于炎症晚期及纤维化期(前期结果已证明)。②预防性过继转输PF小鼠的PBL或Tregs对NS组小鼠肺无明显影响。③预防性过继转输PF小鼠的PBL能够稳定BLM诱导的小鼠PF病程,主要减轻急性炎症期的炎症反应以及纤维化期的胶原沉积。④预防性过继转输PF小鼠外周血的Tregs能够稳定BLM诱导的小鼠PF病程,主要减轻急性炎症期和交界期的炎症反应、胶原沉积。
　　二、急性过继转输PF小鼠外周血Tregs对博来霉素诱导小鼠PF病程的影响
　　方法:采用气管内灌注BLM,建立小鼠PF模型。造模14d后,采用密度梯度离心和流式分选法,分别获取PF小鼠外周血中的淋巴细胞和Tregs。将获得的PBL或Tregs过继转输给另一批已造模3d的小鼠,于造模后的7、14、21和28d分批处死小鼠。采用HE染色和肺HYP含量测定评价PF变化程度。
　　结果:过继转输PBL对NS组肺病理学及HYP含量无明显影响,仅见少量炎性细胞浸润。过继转输PBL能够加重BLM组肺病理学病变,肺HYP含量21d较未过继转输PBL的BLM组明显增高。过继转输Tregs能够加重BLM组肺病理学病变,肺HYP含量28d较未过继转输Tregs的BLM组明显增高。
　　小结:急性过继转输PF小鼠的PBL能够加重博来霉素诱导的小鼠PF病程,主要加重交界期的炎症反应。同样,急性过继转输PF小鼠的Tregs能够加重博来霉素诱导的小鼠PF病程,但主要加重纤维化期胶原沉积。
　　第二部分异莲心碱和泼尼松对博来霉素诱导小鼠PF病程中Tregs变化的影响
　　目的:研究异莲心碱和泼尼松对BLM诱导小鼠PF病程中Tregs变化的影响,结合疗效评价Tregs与PF病程的相关性。
　　方法:将昆明小鼠分为6组,分别为对照组、模型组、对照+泼尼松组、模型+泼尼松组、对照+异莲心碱组、模型+异莲心碱组。采用气管内灌注 BLM制备PF模型,造模后第2d开始,各组小鼠分别灌胃给予生理盐水/泼尼松/异莲心碱,一日两次。于3、7、14、21和28d分批处死小鼠。采用HE和Masson染色评价肺改变评价PF病变程度;采用ELISA法测定血浆中TGF-β1、IFN-γ含量变化,评价PF病程中Th1/Th2反应;采用流式细胞术检测小鼠外周血中Tregs比例变化。
　　结果:①对照+泼尼松组、对照+异莲心碱组肺无明显变化;与模型组比较,模型+泼尼松组3～14d炎症明显减弱,但21、28d胶原沉积并未明显减少;与模型比较,模型+异莲心碱组3～14d炎症有所减弱,21d、28d胶原沉积明显减少。②模型+泼尼松组血浆中,7～28d IFN-γ含量明显高于模型组,3d、7d、14d、28d TGF-β1含量明显低于模型组。③模型+异莲心碱组血浆中,21d、28d IFN-γ含量明显高于模型组,3d、14d、21d、28d TGF-β1含量明显低于模型组。④模型+泼尼松组外周血中Tregs的比例,3d、7d较模型组明显降低,21d、28d较模型组明显升高。⑤模型+异莲心碱组小鼠外周血中Tregs比例,7d、21d、28d较模型组明显降低。
　　小结:泼尼松可能是通过纠正PF急性炎症期的Th1/Th2失衡和降低Tregs,而对 PF炎症早期具有治疗效果。异莲心碱可能是通过调整 PF纤维化期的Th1/Th2失衡(主要影响Th2)和降低Tregs,而对PF纤维化期具有治疗效果。这些可能是异莲心碱与泼尼松对PF治疗的最佳时间点不同的原因。

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前 言

参考文献

第一部分 来源于PF小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞对博来霉素诱导小鼠PF病程的影响

第一节 预防性过继转输PF小鼠的外周血Tregs对博来霉素诱导小鼠PF病程的影响

1 材料与仪器

2. 方法

3 结果

第二节 急性过继转输淋巴细胞/CD4+CD25+调节性T细胞对PF病程的影响

1. 材料与仪器

2. 方法

3 结果

4讨论

第一部分结论

参考文献

第二部分 异莲心碱和泼尼松对博来霉素诱导小鼠PF病程中Tregs变化的影响

1. 材料与仪器

2 方法

3 结果

4讨论

参考文献

全文总结

1. 过继转输淋巴细胞对于PF病程的影响很可能是淋巴细胞中的Tregs起的作用。

2. 预防性过继转输Tregs主要通过减轻急性炎症期的炎症反应以及炎症与纤维化期交界期的炎症反应、胶原的沉积，稳定BLM诱导的小鼠PF病程；急性过继转输Tregs主要通过加重纤维化期胶原纤维的沉积，加重BLM诱导的小鼠PF病程。

3. 泼尼松和异莲心碱分别主要降低急性炎症期和纤维化期 Tregs，这可能是造成异莲心碱对PF治疗效果优于泼尼松的原因。

创新点

展望

综述

1. PF的各种形式

2. T淋巴细胞的相关研究

3. 展望

Reference List

致谢