一种新型脊髓压迫动物模型的建立及自噬因子beclin1表达研究

摘要

目的：
　　1、建立一种新型的脊髓压迫动物模型；
　　2、通过beclin-1等因子的变化趋势探讨自噬在脊髓受压后的发展过程及规律；
　　3、研究动物脊髓受压后的影像学、病理学变化。
　　方法：
　　将一种吸水后可以发生体积膨胀的材料植入SD大鼠的C6-C7硬膜外间隙。从而对SD大鼠脊髓造成压迫，但是不造成运动功能障碍。建立一种脊髓受压但是无运动功能障碍的新型脊髓压迫动物模型。将30只体重为200g-250gSD大鼠随机分为对照组及实验组。首先通过后路手术暴露SD大鼠颈椎椎板，然后将吸水膨胀材料植入大鼠C6-C7硬膜外间隙。对照组SD大鼠行假手术，即不植入吸水膨胀材料。术后待SD大鼠清醒后观察其运动功能，如果出现四肢痉挛、无力、四肢运动不协调等运动功能障碍表现时即表明手术对实验动物造成急性损伤，随即淘汰该实验动物并进行样本补充。术后1天、3天、7天、10天、14天分别处死实验组及对照组SD大鼠各3只，进行运动行为学（BBB评分）、MRI、HE、TUNEL染色及Beclin-1免疫组织化学染色检测。观察上述指标在不同时间段的变化趋势。统计学方法：计量资料采用样本均数±标准差表示。符合正态分布的计量资料采用配对T检验，实验组及对照组组内采用SNK-q检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　结果：
　　术后各时间点进行MRI检查,结果表明吸水膨胀材料进入C6-C7硬膜外间隙，无脱出及滑移，并造成椎管内脊髓压迫。术后实验组及对照组动物在各个时间点未出现运动功能障碍。HE染色显示实验组受压节段脊髓出现明显压迹，神经元细胞变性、空泡样变。TUNEL凋亡检测发现从造模后1天开始出现阳性细胞，对照组相应节段脊髓则未出现相应变化。Beclin-1免疫组化染色检测表明:造模后对照组 Beclin1阳性细胞有少量表达。实验组Beclin-1阳性细胞于造模后第1天开始升高，第7天达到峰值，造模后第14天表达量与对照组无统计学差异（P＜0.05）。
　　结论：
　　本实验所建立的脊髓压迫动物模型可以较好模拟在脊髓受到压迫后的病理、生理变化，模型建立过程简单，可进行各种相关检查，结果可重复性较好，实验动物术后生存率较高，是研究此类疾病可靠的动物模型。HE染色及TUNEL凋亡细胞检测结果表明此模型可模拟脊髓受到慢性压迫后的病理改变及细胞凋亡现象。在脊髓受到压迫后不同时间点beclin-1阳性细胞变化规律表明:自噬可能参与脊髓慢性损伤后的病理生理变化过程，但其确切机制及发挥的作用仍需要进一步的研究。