apoE修饰阳离子脂质体介导HSV-tk基因对肝癌细胞的杀伤作用研究

摘要

目的：
　　1.检测本实验室合成的基因载体apoE修饰脂质体（apoE-lipoplex）对肝（癌）细胞的结合特异性。
　　2.构建包含自杀基因HSVtk的质粒pSurvivin-TK-PBI-CMV2，用apoE-lipoplex转染其进入肝(癌)细胞，检测HSVtk基因在细胞中的表达情况。
　　3.检测apoE-lipoplex/HSVtk/GCV系统对肝癌细胞的靶向杀伤作用。
　　方法：
　　1.用apoE-lipoplex携带pGenesil-1质粒分别转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和正常肝细胞HL-7702，宫颈癌细胞Hela，流式细胞仪检测转染率。
　　2.用apoE-lipoplex携带pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒分别转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702，RT-PCR检测HSVtk基因的mRNA表达水平，western blot检测HSVtk蛋白表达。
　　3. apoE-lipoplex携带pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702，加入前体药物更昔洛韦（GCV）。2 d后流式细胞仪检测细胞凋亡率；MTT法检测细胞增殖；Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态变化。
　　结果：
　　1. apoE-lipoplex对肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702的转染率相比宫颈癌细胞Hela更高，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　2. apoE-lipoplex携带pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702后，HSVtk基因的mRNA和蛋白在两种肝癌细胞中均有明显表达，但在肝细胞HL-7702中均未检测到表达。
　　3.流式结果表明，转染组肝癌细胞HepG2、Huh-7凋亡显著（P<0.05）；MTT结果表明，转染组肝癌细胞HepG2、Huh-7增殖减弱显著（P<0.05）；荧光显微镜下观察，转染组肝癌细胞有凋亡的特征性形态学改变。
　　结论：
　　1. apoE-lipoplex对肝（癌）细胞具有较高的转染率，有靶向性转染肝（癌）细胞的能力。
　　2.相比肝细胞HL-7702，apoE-lipoplex介导的survivin启动子驱动的HSVtk基因在肝癌细胞HepG2、Huh-7中有特异性表达。
　　3. apoE-lipoplex介导的pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒+GCV系统，对肝癌细胞HepG2、Huh-7有选择性杀伤作用，而对肝细胞HL-7702未见明显杀伤作用。
　　本课题为国家自然科学基金“乳糜微粒定向介导 TK基因载体系统对肝癌杀伤作用（编号：81172136）”。