血塞通及川芎嗪对细胞色素P450不同亚型代谢酶影响的研究

摘要

血塞通和川芎嗪为临床上广泛应用的治疗心脑血管疾病的两种中药，目前已有大量针对这两种药物的药理学的研究，使得临床对它们的药理学特征有了深刻的认识，但尚未见有关其对CYP450的影响的研究报告，因此，有必要对它们对于CYP450的影响进行研究，从而全方位地对这两种中药进行安全性评价、预测它们与其他药物间的相互作用并为临床合理用药提供参考。 人类肝脏中与药物代谢密切相关的CYP450亚型主要有CYPlA2和CYP3A4等。许多因素可以造成CYP450酶活性的差异，从而引起人体内许多药物的代谢和效应的差别，但最主要的还是药物或环境致癌物、化学毒物的成分和结构。药物分子量、分子骨架、空间位阻以及理化性质(包括亲水性)等的不同，都可引起对药酶影响的不同。 本文采用探针药物法，按照大鼠离体试验的途径，使用2种探针药物咖啡因、氨苯砜，评价血塞通和川芎嗪对CYP450亚型CYP1A2、CYP3A4的诱导或抑制作用。 通过测定肝微粒体蛋白含量及CYP450含量，表明本实验方法所制备的肝微粒体符合体外实验的要求。通过对孵育时间和孵育蛋白浓度的选择，确定本实验所采用的孵育时间为60分钟，孵育蛋白浓度为1mg/ml。本文建立了同时检测咖啡因与氨苯砜两种探针药物的HPLC方法，内标甲硝唑和咖啡因、氨苯砜的保留时间分别为5.2、7.5、9.7分钟。通过回收率、精密度、灵敏度等方法学考察表明，可作为探针药物来评价血塞通和川芎嗪对CYP450亚型的影响。 通过试验发现：血塞通对肝药酶CYP1A2有诱导作用，大鼠离体试验的t1/2和对照组相比分别为18.71±1.13分钟和25.04±1.86分钟(P<0.001)；而对CYP3A4无影响，大鼠离体试验的t1/2和对照组相比分别为16.62±0.72分钟和16.48±1.08分钟(P=0.8214).川芎嗪对肝药酶CYPlA2和CYP3A4均无影响，大鼠离体试验咖啡因的t1/2和对照组相比分别为27.42±1.42分钟和25.04±1.86分钟(P=0.1883)；氨苯砜的t1/2和对照组相比分别为15.85±1.30分钟和116.48±1.08分钟(P=0.4271)。 药物对CYP450各亚型酶的影响不同，在同CYPIA2及CYP3A4代谢相关的药物合用时，应充分考虑这种差异，以避免可能出现的毒性反应或不良反应。并更加准确地进行新药的临床前安全性评价以及制定合理的给药方案。

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论文说明：缩略词表

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第一章综述

1.血塞通介绍

1.1对心血管系统的影响

1.2对脑血管的影响

1.3其他作用

2.川芎嗪介绍

2.1对心血管系统的影响

2.2对脑血管的影响

2.3对其他系统的影响

3.细胞色素P450酶介绍

3.1 CYP450的分布及其结构

3.2 CYP450的命名及亚型

3.3影响CYP450基因表达的因素

3.4对CYP450的诱导和抑制

4.研究药物对CYP450诱导和抑制作用的意义

5.CYP450研究方法

5.1整体试验研究CYP450

5.2离体试验研究CYP450

5.3探针药物的选择

第二章肝微粒体的制备与孵育

1.实验材料

1.1实验所需试剂、药品及其配制

1.2实验动物

1.3实验仪器和设备

2.实验方法

2.1肝微粒体的制备

2.2肝微粒体基本参数的测定

3.体外孵育

3.1孵育时间的选择

3.2孵育蛋白浓度的选择

第三章肝微粒体中咖啡因、氨苯砜HPLC测定方法的建立及方法学认证

1.试验材料

1.1实验所需试剂

1.2实验仪器和设备

2.检测方法的建立

2.1待测成分的提取

2.2咖啡因、氨苯砜的实验条件

2.3色谱行为

3.检测方法的方法学认证

3.1标准曲线

3.2日内差及日间差

3.3回收率试验

3.4灵敏度试验

第四章肝微粒体中咖啡因、氨苯砜检测结果及分析

1.与CYP1A2有关的结果

2.与CYP3A4有关的结果

第五章讨论

参考文献

创新点

致谢

个人简历

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