海参主要鞘脂类物质的分子种分析及活性初探

摘要

海参属于棘皮动物门海参纲，自古就因其较高的食用和药用价值而被列为“八珍”之首。海参中鞘脂类主要为脑苷脂和神经酰胺，在多种生物活性方面如抗肿瘤、调节细胞生长等均具有突出活性。但海参脑苷脂和神经酰胺组成结构复杂，种类繁多，难以进行结构鉴定和分子种分析。因此，迫切需要建立一种快速有效的鉴定方法。
　　本论文对多种海参中鞘脂类物质进行了定性定量测定，并采用高效液相制备法成功制备出了三种长链碱单体，最后对叶瓜参脑苷脂、神经酰胺和长链碱进行了HepG2肿瘤细胞增殖活性实验。主要结论如下：
　　1.本文通过采用HPLC-ELSD法，以TSKgel CN-80Ts柱为分离柱，正己烷-异丙醇-二氯甲烷-甲醇为流动相，对20种海参样品的脑苷脂和神经酰胺进行了同时测定。结果表明不同种海参中脑苷脂和神经酰胺含量存在较为明显的差异，含量范围分别为0~4.44mg/g和0.24~2.21 mg/g。
　　此外，采用LC-ESI-QQQ方法，分析了仿刺参、革皮氏海参、白乳参、海地瓜、阿拉斯加红参、阿拉斯加刺参、叶瓜参等七种不同品种海参及三种不同产地仿刺参的脑苷脂分子种组成，以及叶瓜参、仿刺参、海地瓜三种海参的神经酰胺组成。结果表明七种海参脑苷脂分子种组成存在明显差异，阿拉斯加红参脑苷脂分子种组成最复杂，有58种脑苷脂单体。根据分子种组成结果推测出d17:1为海参的特征长链碱结构，d17:1-C24:1h为特征性脑苷脂分子。海参脑苷脂的聚类分析结果表明脑苷脂分子种分类与海参品种显著相关。三种不同产地的仿刺参脑苷脂分子种分析表明，脑苷脂的分子种组成与产地有关。海地瓜、叶瓜参和仿刺参的神经酰胺分子种的结果表明，海参中神经酰胺与脑苷脂的脂肪酸和长链碱组成相似，但比例不同，可能与其体内合成代谢途径有关。
　　通过对海参样品中脑苷脂和神经酰胺的定性定量分析，可以初步明确不同种海参脑苷脂间存在的显著差异与海参的种类、地域等因素的联系，为日后脑苷脂指纹图谱的建立奠定基础，为海参等食（药）用水产品的开发利用、营养评价和质量控制等提供理论研究基础和科学依据。
　　2.通过酸水解方法水解叶瓜参总脂得到长链碱组分，通过柱层析纯化后得到纯度为94.7％的总长链碱。采用HPLC方法，以TSKgel ODS-4柱为分离柱，甲醇-PBS溶液为流动相，成功分离出d17:1，d18:2，d18:3的三种LCB单体。为研究海参鞘脂类物质的构效关系提供了依据和方法参考。
　　3.研究了叶瓜参中的神经酰胺、脑苷脂系列物和长链碱单体的HepG2细胞增殖活性增殖实验，使用MTT法检测受试物在24h及48h对HepG2细胞增殖的影响。结果表明，叶瓜参的6种鞘脂类物质中仅长链碱单体（d17:1，d18:2）具有极显著抑制HepG2细胞增殖的活性，且呈现明显的剂量效应关系。d17:1，d18:2对HepG2细胞24 h和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别为和5.22、5.24μg/mL以及4.96、5.32μg/mL。脑苷脂和神经酰胺几乎没有显著抑制HepG2细胞增殖的作用。结果表明海参长链碱不仅是鞘脂类的骨架成分，也是重要的抗肿瘤活性成分，对开发新型海洋药物或海洋功能食品具有一定的参考意义。

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0 前言

0.1 海参概述

0.2 鞘脂概述

0.3 本研究的目的和意义

1 海参主要鞘脂的定量及分子种组成分析

2 不同结构叶瓜参长链碱的制备与分析

2.1 材料和仪器

2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.4．本章小结

3 叶瓜参主要鞘脂对HepG2细胞增殖抑制活性

3.1实验材料和仪器

3.2 实验方法

3.3 结果

3.3 讨论

3.4 本章小结

4 结论

4.1 总结

4.2 本论文主要创新点

参考文献

致谢

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