柘树根多糖的分离纯化、理化性质及免疫活性的研究

摘要

要用热水浸提柘树根,经3520吸附柱,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,透析和DEAE-Sephadex A-50柱纯化,得到3类多糖CPS-1、CPS-2和CPS-3.HPLC等分析证实,CPS-1为均一组分,数均分子量为4461,重均分子量为6572;CPS-2含有少量杂质,数均分子量为24709,重均分子量为68110;CPS-3为混合组分.TLC和GCMS分析表明,CPS-1由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比依次为1.00:14.02:0.74:2.62:30.06:17.72;CPS-2由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比依次为1.00:2.68:0.11:0.16:0.27:3.83.元素分析表明,CPS-1、CPS-2均为含硫的氨基糖.IR、<'1>HNMR及<'13>CNMR分析表明,CPS-1的糖苷键为α-构型,具有吡喃型糖环,C-2,C-3,C-4中某一碳上发生取代,而C-6未发生取代.CPS-2糖苷键可能为β-构型,糖环构型为呋喃型.用MTS-PMS方法研究了三种柘树根多糖(CPS-1,CPS-2,CPS-3)在体外直接及协同有丝分裂原ConA或LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,用中性红比色法测定了CPS-1,CPS-2,CPS-3对腹腔巨噬细胞(MΦ)吞噬功能的影响,并与已经临床应用的香菇多糖(LNT)作了比较.CPS-1,CPS-2在一定浓度可显著增强小鼠腹腔MΦ吞噬中性红的能力,CPS-1在100μg/mL与空白对照相比达到了显著性差异,50μg/mL与空白对照相比达到了极显著性差异,在50μg/mL与最佳浓度(50μg/mL)的LNT作用效果相同;CPS-2在100μg/mL与空白对照相比达到了显著性差异,与LNT作用效果无显著性差异;CPS-3在此范围内无明显作用.该文结果表明,CPS-1,CPS-2,CPS-3可能是活性高于LNT的免疫增强剂.

目录

原创性声明和关于学位论文使用授权的声明

摘要

Abstract

本文使用的缩写符号说明

第一章综述：活性多糖的研究进展

1.1已发现的活性多糖

1.1.1真菌多糖

1.1.2植物多糖

1.1.3动物多糖

1.2多糖的免疫调节作用

1.2.1对免疫细胞的调节

1.2.2对网状内皮系统(RES)的作用

1.2.3对补体系统的作用

1.2.4对细胞因子的调节

1.3多糖的作用机制

1.3.1多糖与受体的作用

1.3.2多糖对淋巴细胞信号传导的作用

1.3.3多糖对基因表达的影响

1.4活性多糖的构效关系

1.4.1分子量的影响

1.4.2单糖组成的影响

1.4.3糖苷键类型的影响

1.4.4溶解度的影响

1.4.5取代基的影响

1.4.6核心寡糖片段的影响

1.4.7高级结构的影响

1.5柘树根多糖的研究目的及意义

第二章材料与方法

2.1材料

2.2仪器

2.3实验方法

2.3.1柘树根多糖的提取

2.3.2柘树根多糖的分离与纯化

2.3.3纯度鉴定

2.3.4糖含量的测定

2.3.5分子量的测定

2.3.6糖组成分析

2.3.7元素分析

2.3.8红外光谱分析

2.3.91HNMR及13CNMR光谱分析

2.3.10脾淋巴细胞增殖实验

2.3.11腹腔MФ吞噬功能实验

2.3.12数据处理

第三章结果与分析

3.1多糖的提取、分离与纯化

3.2纯度鉴定

3.2.1 DEAE-Sephadex A-50柱层析

3.2.2碘-碘化钾反应

3.2.3 双缩脲反应

3.2.4紫外分析

3.2.5高压液相色谱分析

3.3糖含量的测定

3.4分子量的测定

3.5糖组成分析

3.5.1薄层层析

3.5.2 GCMS分析

3.6元素分析

3.7红外光谱分析

3.81HNMR及13CNMR光谱分析

3.9脾淋巴细胞增殖实验

3.9.1 CPS-1，CPS-2，CPS-3直接对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

3.9.2 CPS-1，CPS-2，CPS-3协同有丝分裂原ConA或LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

3.10 CPS-1，CPS-2，CPS-3对小鼠腹腔MФ吞噬中性红的影响

第四章讨论

参考文献

致 谢