环状RNA CDR1as在牙周膜干细胞成骨向分化中的作用研究

摘要

牙周组织再生过程的生物学基础是牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSCs)增殖及分化进程的有序调控。其中牙周膜干细胞的成骨向分化是牙周组织再生并不断改建、行使咀嚼功能的关键，学者们期望通过研究其调控机制来人为指导这一过程，进而促进牙周组织再生。环状RNA(circluar RNA，circRNA)是一类具有环状结构的非编码RNA分子。现有研究表明，circRNA在疾病中发挥着重要的调控作用，包括肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病、皮肤损伤、骨关节炎等。另外，circRNA还广泛参与组织再生、干细胞分化，比如鼠肝脏再生的初级阶段，人诱导多潜能干细胞衍生为心肌细胞的分化过程，表皮干细胞的分化，骨形态形成蛋白2诱导MC3T3-E1158细胞的成骨向分化。但截至目前，circRNA在牙周膜干细胞成骨向分化过程中的作用尚不清楚。
　　目的:
　　研究牙周膜干细胞成骨向分化过程中circRNA表达谱的变化，并进一步研究circRNA的调控作用，以期为人为指导这一过程、促进牙周组织再生提供新的思路和策略。
　　方法:
　　1.采用组织块法分离培养人牙周膜干细胞(hPDLSCs)并鉴定其生物学特性。
　　2.将正常培养及成骨诱导7d的hPDLSCs送往测序公司进行高通量测序，并通过生物信息学方法进行circRNA鉴定、差异表达分析、功能预测及实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证。
　　3.筛选差异表达明显的circRNA，通过转染干扰慢病毒敲减circRNA表达，检测hPDLSCs的成骨分化能力。
　　结果:
　　1.成功分离培养hPDLSCs，并进行传代培养。培养的hPDLSCs具有间充质干细胞表型及多向分化能力，符合间充质干细胞的生物学特性。
　　2.测序结果筛选出1456个差异表达的circRNA，功能预测分析表明circRNA可能通过亲本基因或微小RNA参与hPDLSCs成骨向分化，qRT-PCR验证结果与测序结果一致，其中circRNA CDRlas表达水平较高且差异表达最明显。
　　3.CircRNA CDRlas参与hPDLSCs成骨向分化，敲减circRNA CDRlas后，hPDLSCs的成骨向分化能力明显降低。
　　结论:
　　CircRNA参与hPDLSCs成骨向分化，circRNA CDRl as促进hPDLSCs成骨向分化1。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

参考文献

第一部分 人牙周膜干细胞的体外分离培养及鉴定

材料与方法

结果

讨论

小结

附图表

参考文献

第二部分 牙周膜干细胞成骨向分化中环状RNA表达谱分析

材料与方法

结果

讨论

小结

附图表

参考文献

第三部分 circRNA CDR1as对牙周膜干细胞成骨向分化的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

附图表

参考文献

全文总结

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文