TRAIL在大肠杆菌中的表达纯化研究

摘要

近年来，药物研究的重点一直集中在抗肿瘤药物领域的研究，在基因工程药物研究中，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)是当前研究的热点之一，早在1995年TRAIL就被发现，它属于TNF家族。与其他的凋亡因子成员相比较，它在多个方面具有优势，可以靶向性的诱导多种肿瘤的凋亡，同时对其他正常的细胞无毒副作用。研究表明，在TRAIL与其他抗肿瘤药物进行联合用药时，能够起到更好的疗效作用，减少药物的注射频率，提高了患者的依从性。
　　本论文主要研究了大肠杆菌中TRAIL的表达和纯化。通过基因重组技术，构建大肠杆菌基因工程菌株，对采用包涵体和外泌形式表达TRAIL进行评估，通过优化发酵工艺，提高表达水平;确定了高效表达发酵工艺。通过对多种纯化方法的研究，并对工艺参数进行优化，确定了简单、易控的适合产业化的生产工艺路线。目的蛋白的纯度能够达到95％以上，建立稳定、可控的适合产业化放大的生产工艺，并初步进行了产品质量检测及稳定性考察。
　　本研究着重对可溶性TRAIL的下游纯化进行研究，研究的方法和确定的工艺可为后续重组蛋白纯化工艺路线的研究提供借鉴。

目录

声明

摘要

符号说明及缩略词

第一章 绪论

1．1 基因工程药物的开发

1．2 TRAIL简介

1．3 大肠杆菌生产基因工程药物

1．4 本课题研究意义及主要内容

第二章 TRAIL在大肠杆菌的表达工艺研究

2．1 材料与方法

2．1．1 原材料

2．1．2 常用仪器设备

2．1．3 菌种培养方法

2．1．4 发酵工艺研究

2．1．5 分析检测方法

2．2 实验结果与讨论

2．2．1 菌种的构建

2．2．2 菌种的初步稳定性研究

2．2．2 TRAIL发酵工艺研究

2．3 本章小结

第三章 TRAIL的分离纯化工艺研究

3．1 材料与方法

3．1．1 原材料

3．1．2 常用仪器设备

3．1．3 捕获工艺研究方法

3．1．4 中间纯化研究方法

3．1．5 精纯化研究方法

3．1．6 稳定性研究方法

3．1．7 分析检测方法

3．2 实验结果与讨论

3．2．1 捕获工艺研究

3．2．2 中间纯化工艺研究

3．2．3 精纯化工艺

3．2．4 产品初步稳定性研究

3．2．5 产品质量初步分析

3．3 本章小结

全文总结及展望

参考文献

致谢