化学合成siRNA对宫颈癌细胞SiHa中E6基因表达的抑制作用

摘要

目的：探讨体外化学合成的HPV(human papolloma virus)16E6的siRNA对HPV16阳性的宫颈癌细胞系SiHa细胞中HPV16 E6基因的抑制作用和对SiHa细胞生物学行为变化的诱导作用。 方法：化学合成三条针对HPV16 E6的siRNA序列，用脂质体法瞬时转染SiHa细胞。实验分两组：未转染组和siRNA转染组。用半定量RT-PCR(反转录-聚合酶链式扩增)技术分别检测未转染组及siRNA转染后24h，48h，72h时HPV16E6基因mRNA的表达，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性，流式细胞技术(FCM)检测细胞周期变化，细胞免疫化学技术检测转染前后细胞中p53蛋白表达水平的变化，透射电镜观察转染前后细胞形态学变化。 结果：1.3条siRNA均能有效抑制E6mRNA的转录表达，以siRNA1作用效果最为明显。 2.MTT检测结果显示20nmol/L、50nmol/L和80nmol/L终浓度转染后细胞增殖活性均有所下降，其中以50nmol/L转染时增殖活性下降最明显。 3.流式细胞术检测结果显示转染后G0/G1期细胞数占生长周期细胞数的比例增多，即表现为G1期阻滞，S期细胞的比例降低。 4.细胞免疫化学检测结果显示转染72h后p53蛋白表达水平增高，转染前后差异有显著性(P<0.05)。 5.转染72 h后透射电镜下可见细胞细胞质浓缩，胞质中出现空泡。 结论：化学合成siRNA可有效沉默SiHa细胞E6基因的转录表达，进而导致细胞生物学行为的改变。针对HPV16E6的RNAi有望成为宫颈癌基因治疗的一种新策略。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章HPV16型E6基因siRNA的选择与建立

1.1仪器、试剂和耗材

1.2实验方法

1.3.结果

1.4讨论

参考文献

第二章HPV16型E6基因沉默宫颈癌细胞后生物学性状的研究

2.1材料与方法

2.2实验方法

2.3结果

结论

参考文献

综述 RNA干扰技术及其在宫颈癌治疗中的应用

攻读学位期间的研究成果

致谢