乙型肝炎病毒经生殖细胞垂直传播的实验研究

摘要

目的：检测乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)阳性卵巢肿瘤患者卵巢组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virusHBV)DNA，探讨HBV可以感染人类卵巢组织细胞，为HBV感染经生殖细胞垂直传递提供实验依据；构建携带乙型肝炎病毒表面抗原基因(HBV S)的真核表达载体，转染肝癌细胞HepG2，检测构建载体及HBV S基因在肝癌细胞中的表达。 方法：应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)和逆转录聚合酶链反应(reversetranscription PCR，RT-PcR)等分子遗传学技术检测卵巢肿瘤患者卵巢组织细胞中HBV DNA、构建重组载体、转染肝癌细胞和检测目的基因表达。 结果： ①PCR、FISH检测结果发现，HBsAg阳性卵巢肿瘤患者卵巢组织细胞存在HBV DNA，与对照组HBsAg阴性卵巢肿瘤患者卵巢石蜡组织细胞中的检测结果比较，实验结果差异高度显著，P<0.01； ②以质粒pBR322-HBV为模板，PCR扩增出3.2kb全长HBV DNA及700 bp的HBV S基因； ③成功构建载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS；④RT-PCR检测载体转染HepG2细胞表达HBV SmRNA。 结论： ①HBV可以感染卵巢组织细胞，HBV感染有可能通过卵细胞进行垂直传播； ②pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS真核表达载体构建成功。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

1.材料与方法

1.1研究对象

1.2试剂与材料

1.3器材及其来源

1.4方法

1.4.1 HBsAg阳性卵巢肿瘤患者卵巢组织HBV DNA检测

1.4.2pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS真核表达载体构建

1.4.3细胞培养及重组质粒转染

1.4.4 RNA提取与RT-PCR

2.结果

2.1 HBsAg阳性卵巢肿瘤患者卵巢组织HBV DNA检测

2.2 pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS重组载体鉴定

3 讨论

结论

参考文献

综述：乙型肝炎病毒基因组转染的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢