RNA干扰survivin基因表达对肝癌细胞放射敏感性影响

摘要

目的:探讨RNA干扰survivin基因表达对肝癌细胞放射敏感性的影响。
　　 方法:构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387。设置空白对照组（不加载体）、阴性对照组(加入pshRNA-survivin-NC)及siRNA转染组（加入pshRNA-survivin-387），用脂质体2000转染HepG2细胞，采用逆转录聚合酶链反应技术检测各组survivin基因mRNA表达水平。分别设置空白对照组、阴性对照组、siRNA转染组、X线照射组、siRNA+X线照射组，收集各组细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡率，MTT法测定细胞存活分数。
　　 结果:siRNA转染组survivin基因mRNA表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组，差异有显著性(F=218.93，q=17.73、18.66，P＜0.05)。siRNA转染+X线照射组细胞凋亡率明显高于其他各组，差异有显著性(F=1421.83，q=13.81～57.48，P＜0.05); siRNA转染组及X线照射组与空白组、阴性组比较，细胞凋亡率也明显提高(q=17.55～39.1，P＜0.05)。siRNA转染+X线照射组细胞存活分数显著低于其他各组(F=2870.58，q=15.32～72.51，P＜0.05); siRNA转染组及单纯X线照射组细胞存活分数与空白对照组、阴性对照组比较也明显降低(q=11.14～73.9，P＜0.05)。
　　 结论:pshRNA-survivin387转染能抑制survivin基因表达，诱导肝癌细胞凋亡，增强肝癌细胞的放射敏感性。

目录

摘要

引言

第1章 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 主要试剂与仪器

1．1．2 细胞株

1．2 方法

1．2．1 重组质粒的构建

1．2．2 细胞分组和转染

1．2．3 RT-PCR技术检测survivin mRNA水平

1．2．4 X线照射

1．2．5 细胞凋亡率的检测

1．2．6 MTT法测定细胞存活分数

1．2．6 统计学分析

第2章 结果

2．1 观察转染效率

2．2 各组survivin mRNA水平比较

2．3 各组细胞凋亡率比较

2．4 各组细胞存活分数比较

第3章 讨论

第4章 结论

参考文献

RNA干扰Survivin基因治疗肝癌的可行性研究

攻读学位期间的研究成果

致谢

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