先天性甲状腺功能减退症伴甲状腺肿大患儿DUOXA2基因突变筛查及致病机理研究

摘要

目的：研究中国山东地区先天性甲状腺功能减退症(CH)伴甲状腺肿大患儿双氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因突变的类型及特点，并对新发现的DUOXA2突变进行功能学研究，以阐明DUOXA2基因突变导致CH伴甲状腺肿大的致病机理。
　　方法：选取山东地区75例CH伴甲状腺肿大的患儿作为研究对象。提取其外周静脉血基因组DNA，采用PCR扩增与直接测序的方法，对DUOXA2基因全部外显子进行突变筛查。并对本实验发现的DUOXA2新突变（c.C78G，p.I26M）进行功能学研究，以DUOXA2野生型或突变型与DUOX2野生型真核表达载体共转染Hela细胞，用Western blot技术检测DUOXA2与DUOX2蛋白的表达，与野生型比较分析突变型DUOXA2导致蛋白表达的改变。应用多功能酶标仪检测H2O2的产生，与野生型比较分析突变体DUOXA2导致DUOX2酶活性的改变。
　　结果：在75例CH伴甲状腺肿大患者中，发现1个新的杂合子错义突变（c.C78G，p.I26M），携带该突变的患者表现为轻度的暂时性甲减。同时发现了1个已知的纯合子无义突变（c.C738G，p.Y246X)，该患者表现型为轻度的永久性甲减。功能学研究证实新发现的突变型DUOXA2（p.I26M）没有引起DUOX2及DUOXA2蛋白量的改变，但导致DUOX2酶活性降低，影响H2O2的生成。
　　结论：在对75例CH伴甲状腺肿大患儿进行DUOXA2突变筛查中，发现了1例新的DUOXA2突变和1例已知的突变。功能研究证实DUOXA2是甲状腺激素合成过程中重要的成分，DUOXA2突变可导致甲状腺激素合成障碍，从而导致CH伴甲状腺肿大的发生。

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引言

第一章 先天性甲状腺功能减退症伴甲状腺肿大患儿DUOXA2基因突变筛查

1.1研究对象

1.2 研究材料

1.3 实验方法

1.4实验结果

1.5讨论

1.6 结论

第二章DUOXA2基因突变导致CH伴甲状腺肿大的致病机理

2.1研究材料

2.2载体构建

2.3 Western Blot检测蛋白表达量差异

2.4 检测DUOXA2基因突变对DUOX2酶活性的影响

2.5实验结果

2.6讨论

2.7结论

参考文献

综述: 先天性甲状腺功能减退症甲状腺激素合成障碍相关基因的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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