新型藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米微球的制备及其对HeLa细胞生长的抑制作用研究

摘要

目的：制备新型负载藻蓝蛋白（C-phycocyanin，C-PC）的羧甲基壳聚糖（Carboxymethyl chitosan，CMC）纳米微球（nanoparticles，NPs），探讨藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米微球（C-PC/CMCNPs）对HeLa细胞生长的影响及分子机制。
　　方法：以CMC和C-PC的质量比、CMC浓度、CaCl2浓度为考察因素，利用正交分析方法，通过检测C-PC/CMCNPs的粒径和包封率，优选C-PC/CMCNPs的制备条件，并在最佳条件下制备 C-PC/CMCNPs。然后将 C-PC、CMC和C-PC/CMCNPs分别作用于HeLa细胞，CCK-8法检测HeLa细胞的增殖，免疫组化法检测JNK蛋白的表达情况，免疫荧光法检测Bcl-2蛋白的表达，Western blotting法检测Caspase-3蛋白表达的差异，流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡情况。
　　结果：筛选出C-PC/CMCNPs的最佳制备条件为CMC与C-PC的质量比为1:2，CMC浓度为1 mg/ml，CaCl2浓度为1 mg/ml。最终所制备的C-PC/CMCNPs的平均粒径为118.4±2.07 nm，并具有较高的包封率（63.2％）；其12 h的累积缓释率超过60％。C-PC、CMC和C-PC/CMCNPs均能抑制HeLa细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，促进促凋亡基因 Caspase-3和JNK的表达，抑制抗凋亡基因 Bcl-2蛋白的表达，其中C-PC/CMCNPs的作用效果最为显著。
　　结论：优化制备条件得到具有高效抗瘤、缓释性能良好的 C-PC/CMCNPs，其抗肿瘤作用可能是通过抑制 HeLa细胞生长、促进凋亡信号在细胞内的转导、最终诱导肿瘤细胞的凋亡来实现的。

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前言

第一章 实验材料

1．1实验仪器设备

1.2实验药品及试剂

1.3细胞株

第二章 实验方法

2.1藻蓝蛋白的提取及浓度测定

2.2纳米微球的制备

2.3纳米微球基本性质的检测

2.4 细胞培养实验

2.5 实验分组

2.6 细胞实验相关检测

2.7统计学分析

第三章 实验结果

3.1 C-PC/CMCNPs的相关检测

3.2 细胞实验相关检测结果

讨论

结论

参考文献

综述: 羧甲基壳聚糖（CMC）和藻蓝蛋白（C-PC）的生物医学应用

攻读学位期间的研究成果

致谢

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