海兔素对酒精性肝损伤大鼠小肠黏膜屏障的保护作用研究

摘要

目的：研究海兔素（Aplysin）对酒精性肝损伤大鼠血浆中D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）、肠脂肪酸结合蛋白（FABP2）和炎性因子（TNF-α、TGF-β）及肠组织中叉头样转录因子O4（FOXO4）等的影响，以初步探讨海兔素对酒精性肝损伤大鼠肠黏膜损伤的保护作用及初步作用机制。
　　方法：
　　1.动物分组及模型建立：两月龄健康雄性Wistar大鼠60只，按体重随机分为4组，每组15只。酒精模型组给予56℃白酒灌胃，第1周5.5ml/(kg·bw·d)，第2周7.5ml/(kg·bw·d)，第3周8.0ml/(kg·bw·d)，第4周9.0ml/(kg·bw·d)，第5周至第8周11ml/(kg·bw·d)；海兔素低、高剂量组首先分别给予Aplysin100、150mg/(kg·bw·d)灌胃，1h后再给予与模型组相同剂量的酒精灌胃；空白对照组灌胃给予10ml/(kg·bw·d)生理盐水，实验共持续8周。大鼠末次灌胃后，禁食12h，按体重给予3％戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，腹主动脉取血及小肠组织。
　　2.透射电镜观察大鼠小肠超微结构变化。
　　3.酶联免疫吸附实验（ELISA）检测大鼠血浆中FABP2、TNF-α、TGF-β、D-LA及DAO浓度。
　　4.免疫组化实验检测小肠组织中FOXO4的表达情况，计算其阳性表达率。
　　结果：
　　1.透射电镜观察发现，空白对照组小肠上皮柱状细胞排列整齐、紧密，微绒毛丰富，紧密连接结构清晰完整；酒精模型组大鼠小肠上皮细胞表面微绒毛排列稀疏，细胞间紧密连接肿大，海兔素高、低剂量组小肠上皮柱状细胞及微绒毛排列情况较酒精模型组得到不同程度改善，紧密连接肿胀减轻；
　　2.酒精模型组大鼠血浆中D-LA、DAO和FABP2的浓度显著增加（P<0.05），而海兔素干预后，可有效抑制酒精诱导的血浆D-LA、DAO和FABP2的浓度升高（P<0.05）；
　　3.免疫组化结果显示，酒精模型组小肠组织FOXO4表达水平明显降低，较空白对照组OD值降低约50%（P<0.05）；海兔素低、高剂量组FOXO4的表达水平显著增高，OD值均显著高于模型组（P<0.05）。
　　4.酒精模型组大鼠血浆中炎性因子TNF-α、TGF-β浓度均较空白对照组显著升（P<0.05），而海兔素低、高剂量组血浆中TNF-α、TGF-β浓度均较酒精模型组明显降低（P<0.05）。
　　结论：
　　1.通过对小肠组织超微结构的观察、血浆中D-LA、DAO及FABP2水平的检测，初步验证了海兔素对酒精性肝损伤大鼠肠黏膜屏障具有一定的保护作用；
　　2.海兔素对酒精性肝损伤大鼠的小肠黏膜屏障的保护作用机制可能与海兔素调节炎性反应相关蛋白FOXO4的表达，减少炎性因子TNF-α、TGF-β的释放有关。