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低抗原性酪蛋白磷酸肽的制备及其功能的研究

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摘要

本试验以牛乳为原料,采用等电点法提取酪蛋白,选用来源于曲霉菌的三种Amano蛋白酶水解酪蛋白并通过钙-乙醇沉淀法制备酪蛋白磷酸肽(CPP),以期获得低抗原性CPP。
   经过单因素试验比较了N“Amano”C蛋白酶、A“Amano”2G蛋白酶和S“Amano”蛋白酶对酪蛋白水解度的影响,最终得出A“Amano”2G蛋白酶的水解效果最理想,并通过正交试验优化了其最佳酶解条件:温度为65℃,pH为7.0,酶:底物=2.5:100,在该条件下酪蛋白的水解度可达18.38%。将该条件下制得的CPP经Bio-Gel P-6层析柱分离后并确定其主要成分分子量为约为1111 Da。
   功能试验结果表明,试验制备的CPP与市售CPP相比,其阻止磷酸钙和磷酸亚铁沉淀形成的效果更好,且随着CPP浓度的增加,促进钙、铁吸收的效果也增加:在90℃以下,温度对CPP的功能无影响;在pH值为8.0~9.O时,CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果最好;柠檬酸和木糖醇都与CPP具有一定的协同作用,均可阻止磷酸钙沉淀形成。
   在细胞培养系中,CPP的浓度在一定范围内对LPS诱导的脾细胞具有促进增值作用,浓度过高则抑制其增值;对无LPS诱导的脾细胞有促进增殖作用,且促进IgA的产生。

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