AP318在烟草烟雾引起的人支气管上皮细胞和人肺微血管内皮细胞氧化应激中的影响

摘要

目的：探讨环肽AP318在烟草烟雾引起的人支气管上皮细胞（HBEpCs）和人肺微血管内皮细胞（HPMVECs）氧化应激中的影响。环肽AP318是人工模拟合成源于人肿瘤坏死因子（TNF）上的类凝集素结构域（the lectin-like domain TIP）的一段肽链。该研究为进一步展开用实验鼠做体内试验给予数据支持，并最终为治疗慢性阻塞性肺病（COPD）找到一种更加安全的生物类药物。
　　方法：首先在培养的细胞中加入50ug/ml的AP318孵育30分钟，然后加入5％含有香烟烟雾总提取物（TSE）原液的细胞培养液处理人支气管上皮细胞5小时和24小时。同时设置阴性对照组（只有细胞培养液）；AP318组（只有AP318和培养液）；TSE阳性对照组（只有TSE和培养液）。通过检测氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）来验证细胞氧化应激损伤的程度；通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL）和检测激活型半胱天冬酶-3（active caspase-3）来验证TSE引起的细胞凋亡程度。
　　结果：
　　1、8-OHdG检测结果显示，5小时和24小时处理的细胞，阳性对照TSE组细胞氧化损伤程度较阴性对照组细胞的氧化损伤程度有显著提高（P<0.05）；同时，除了5小时处理的上皮细胞，AP318+TSE组细胞的氧化损伤程度较TSE组细胞的氧化损伤程度都有明显降低，差异显著（P<0.05）或及其显著（P<0.005）。
　　2、TUNEL检测结果显示，5小时和24小时处理的细胞，阳性对照TSE组细胞凋亡程度较阴性对照组细胞凋亡程度有显著提高（P<0.05）；同时，AP318+TSE组细胞凋亡程度较TSE组细胞凋亡程度有明显降低，差异显著（P<0.05）或及其显著（P<0.005）。
　　3、激活型半胱天冬酶-3（active caspase-3）检测结果显示，5小时处理的细胞早期凋亡无显著差异（P>0.05）；24小时处理的细胞，TSE组细胞早期凋亡指数较阴性对照组细胞有显著提高（P<0.05）；同时，24小时处理的细胞，AP318+TSE组细胞早期凋亡指数较TSE组细胞早期凋亡指数有明显降低，差异显著（P<0.05）。
　　结论：
　　1、香烟烟雾总提取物能够引起人支气管上皮细胞和人肺微血管内皮细胞的氧化应激并造成细胞的死亡和凋亡。
　　2、AP318能够阻止或减弱香烟烟雾引起的人支气管上皮细胞和人肺微血管内皮细胞的氧化应激损伤。

目录

缩 略 语 表

1 引言

1.2.1 国外研究现状

1.2.2 国内研究现状

2 材料与方法

2.2 细胞培养及处理：

3 结果分析

3.2 TSE引起的人肺微血管内皮细胞凋亡的早期检测以及环肽AP318 对细胞凋亡的影响

3.3 TSE造成人支气管上皮细胞的氧化损伤以及标志物检测

3.4 TSE造成人肺微血管内皮细胞的氧化损伤以及标志物检测

3.5 通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法再次证实TSE引起的人支气管上皮细胞的凋亡，以及环肽AP318的作用

3.6 通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法再次证实TSE引起的人肺微血管内皮细胞的凋亡，以及环肽AP318的作用

4 讨论与结论

致谢

参考文献

作 者 简 介