马骨髓间充质干细胞系的建立及向软骨细胞诱导分化的研究

摘要

本文建立了马骨髓间充质干细胞系，对其生物学特征和干细胞特性进行了鉴定（CD34、CD44、CD45、CD90、CD105、SOX2、Nanog），并在特定的软骨分化培养基中进行培养，使其分化为软骨细胞，经组织学阿尔新蓝染色、对软骨细胞的特异表达基因Collagen type II进行实时定量PCR鉴定后，发现在经过诱导分化的细胞中出现了类似于软骨细胞的形态特征，同时表达了软骨的特异基因。
　　本研究主要内容包括：⑴在该实验中建立了马骨髓间充质干细胞系，发现间充质干细胞的形态均呈长梭型，类似于成纤维细胞，通过对该细胞系的P3细胞计数后，发现生长曲线呈“S”型，经计算，细胞倍增时间为31h。⑵对骨髓间充质干细胞的P3代细胞进行PCR分析，发现骨髓间充质干细胞表达了转录因子 SOX2、NANOG，以及细胞表面特异性基因 CD14、D90、CD105，但不表达造血干细胞因子CD34和白细胞因子CD45。⑶将骨髓间充质干细胞分别在诱导培养液和普通培养液中进行培养，发现经诱导培养的分化组细胞形态发生了明显的变化，呈“石头状”，而普通培养的对照组细胞形态没有任何变化。接着对两组细胞分别进行阿尔新蓝染色的组织学鉴定，发现分化组细胞被染成了蓝色，说明有蛋白聚糖的分泌，而对照组细胞没有着色；最后以Collagen type II为目的基因、18S为内参基因，对两组细胞进行实时定量PCR鉴定，结果显示，分化后的细胞有Col的表达，但对照组细胞没有。

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1 间充质干细胞的研究进展

1.1.1 干细胞综述

1.1.2 间充质干细胞综述

1.1.3 骨髓间充质干细胞的生物学特性

1.1.4 骨髓间充质干细胞的多向诱导分化

1.2 间充质干细胞的应用及存在的问题

1.2.1 间充质干细胞的应用

1.2.2 间充质干细胞的研究展望

1.3 本研究的目的意义及主要内容

1.3.1 研究的目的及意义

1.3.2 主要研究内容

2马骨髓间充质干细胞的分离与培养

2.1 材料与方法

2.1.1 实验材料

2.1.2 实验试剂

2.1.3 实验仪器及耗材

2.1.4 实验方法

2.2 实验结果与分析

2.2.1 马BMSC的体外分离培养

2.2.2 细胞生长曲线的绘制及倍增时间的计算

2.2.3 马BMSC干细胞转录因子基因的检测

2.3 讨论

2.3.1 马MSCs的分离与培养

2.3.2 细胞冻存

2.3.3 马BMSCs的生物学特性

2.4 小结

3 马间充质干细胞向软骨诱导分化及鉴定

3.1 材料与方法

3.1.1 实验材料

3.1.2 实验试剂

3.1.3 实验仪器及耗材

3.1.4 实验方法

3.2 实验结果与分析

3.2.1 形态学鉴定

3.2.2 组织学鉴定

3.2.3 基因鉴定

3.2.4 实时定量PCR

3.3 讨论

3.4 小结

4 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介