不同因素对牛胆汁中甘氨胆酸提取的影响及甘氨胆酸HPLC的方法学研究

摘要

本研究旨在考察采用乙醇沉淀法及柱色谱法从牛胆汁中提取甘氨胆酸（Glycocholic acid，GCA）的过程中，流速、盐析添加NaCl的量、pH值等因素对甘氨胆酸提取量及纯度的影响，以便建立一条更加优化的从牛胆汁中提取甘氨胆酸的工艺技术路线。并且初步建立高效液相色谱法检测甘氨胆酸的方法，为甘氨胆酸的检测提供一个新的、高效的检测方案。试验采用四因素三水平的正交试验设计方案，按照正交设计表L9(34)研究和分析了从牛胆汁中提取甘氨胆酸的过程中，流速、盐析添加NaCl的量、萃取时的pH值以及流动相比例对甘氨胆酸纯度以及提取量的影响。正交试验结果表明，从牛胆汁中提取甘氨胆酸的最优组合工艺为在容积为200mL的层析柱做分离纯化，每柱层析55g硅胶作为固定相，氯仿和正丁醇的混合溶剂作为流动相进行洗脱，每柱装样量为100mL牛胆汁，流速为水平1，pH值为2，流动相为比例3，盐析添加NaCl的量为水平1，可从每100 mL牛胆汁中提取甘氨胆酸0.3104g，纯度为96.25％，回收率在65%以上。利用薄层层析法、薄层色谱法以及高效液相色谱法对甘氨胆酸进行了定性、定量分析。建立的检测甘氨胆酸的高效液相色谱法的检测条件为：波长210nm，柱温30℃，流动相为乙腈：水=35:65，流速0.5mL/min，经方法学研究初步考察，方法稳定可行，可用于甘氨胆酸的检测。利用正交试验设计筛选出的最优组合工艺提取出的甘氨胆酸量较大、纯度高、方法简便、成本低廉且生产周期短。建立的高效液相色谱法检测甘氨胆酸的方法稳定可靠。

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1 胆汁的概况

1.2 胆汁酸的代谢及其生理功能

1.2.1 胆汁酸的代谢

1.2.2 胆汁酸的生理功能

1.3.1 甘氨胆酸的药学研究

1.3.2 甘氨胆酸的药理作用

1.4 目的和意义

2 试验部分

2.1 试验材料

2.1.1 药品与试剂

2.1.2 主要仪器设备

2.2 研究内容与方法

2.2.1 不同因素对牛胆汁中提取甘氨胆酸的影响

2.2.2 甘氨胆酸定性、定量分析

2.2.3 牛胆汁中提取甘氨胆酸的正交试验

2.2.4 甘氨胆酸HPLC的色谱条件

2.2.5 甘氨胆酸HPLC的方法学研究

3 试验结果

3.1 四种因素对牛胆汁中GCA提取量影响的研究

3.1.1 对照品GCA的标准曲线

3.1.2 薄层层析结果

3.1.3 薄层色谱结果

3.1.4 HPLC检测结果

3.1.5 牛胆汁中GCA提取量的结果

3.1.6 牛胆汁中GCA提取量的直观法分析结果

3.2.1 牛胆汁中GCA的纯度结果

3.2.2 牛胆汁中GCA纯度的直观法分析结果

3.3 优化组合的筛选结果

3.4 不同组合工艺提取甘氨胆酸的对比试验结果

3.5提取工艺回收率结果

3.6 甘氨胆酸高效液相色谱法的方法学研究结果

3.6.1 色谱条件

3.6.2 方法学研究

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介