Th17/Treg免疫失调在BALB/c和C57BL/6小鼠DSS诱导急性肠炎中的作用研究

摘要

目的:炎症性肠病（Inflammatory bowel disease，IBD）是一种原因不明的非特异性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克隆恩病(Crohn's disease，CD)，以大肠和小肠的炎症为主要特征。IBD发病机制目前尚未完全阐述清楚，认为该病是由T细胞及其分泌的细胞因子介导的自身免疫性炎症，除了经典的Th1和Th2型免疫应答的偏倚，近年来发现Th17细胞和Treg细胞也参与了IBD病变的形成。基因遗传背景不同会导致该病在不同个体间出现明显差异，但Th17和Treg细胞如何具体参与不同基因遗传背景小鼠DSS诱导急性肠炎的发生机制尚不清楚。本实验拟通过观察不同基因遗传背景小鼠在DSS诱导急性肠炎中肠黏膜局部相关淋巴组织内的免疫应答，尤其是Th17/Treg细胞及相关细胞因子表达的情况，比较不同基因遗传背景小鼠对DSS诱导急性肠炎敏感性的差异，探讨Th17和Treg细胞应答参与急性肠炎的发生机制。
　　方法:1、DSS诱导急性肠炎在BALB/c和C57BL/6小鼠中的建立及易感性分析。采用6-8周BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠，给予3.5％DSS溶液自由饮用6天，建立DSS诱导急性实验性肠炎模型，评估疾病活动指数(DAI)，组织病理学方法观察肠炎的强弱程度。应用流式细胞分析技术表面染色检测中性粒细胞、巨噬细胞的比例;应用ELISA技术检测LPL分泌的细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-6)的含量;应用real-time PCR技术检测结肠组织和肠系膜淋巴结细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-4和IL-6)mRNA的表达。2、DSS诱导急性肠炎后BALB/c和C57BL/6小鼠Th17和Treg细胞变化的比较。提取肠固有层淋巴细胞和肠系膜淋巴结细胞，应用流式细胞分析技术检测LPL和MLN中αβT、γδT、效应性T细胞、Treg细胞及LPL中Th1和Th17细胞的比例;应用ELISA技术检测LPL中Th17和Treg相关细胞因子(IL-17A、IL-17F、IL-22和IL-10)的含量;应用real-time PCR技术检测结肠组织和肠系膜淋巴结细胞因子(TGF-β、IL-10、IL-17A、IL-21、IL-22和IL-23)mRNA的表达。
　　结果:1、与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠对DSS急性肠炎易感性明显降低。BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠经DSS诱导后均可发生急性肠炎;与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠经DSS诱导肠炎DAI评分较高，生存率较长，肠炎症状明显缓解。经DSS诱导肠炎后，与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠肠固有层和MLN内中性粒细胞比例减少，肠固有层中巨噬细胞比例升高;肠固有层内Th1型细胞因子(IFN-γ、TNF-α)含量显著减少，而Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)含量显著升高;肠组织和肠系膜淋巴结内Th1型细胞因子（IFN-γ）mRNA显著减少，而Th2型细胞因子含量(IL-4、IL-6)mRNA显著升高。2、57BL/6小鼠与BALB/c小鼠炎症性肠黏膜内Th17与Treg细胞应答水平存在明显差异。与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠炎症性肠黏膜内γδT、效应性T细胞比例明显下降。与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠炎症性肠黏膜内Treg细胞比例和IL-10、IL-17A、IL-22mRNA明显升高。肠固有层中Th1和Th17比例和IL-10、IL-17F、IL-22含量显著升高。
　　结论:1、与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠对DSS诱导肠炎易感性明显下降，肠炎症状明显缓解。2、与C57BL/6小鼠相比较，正常BALB/c小鼠肠道黏膜相关淋巴组织内Th1型细胞因子(IFN-γ、TNF-α)表达水平明显降低。3、与C57BL/6小鼠相比较，BALB/c小鼠炎症性肠黏膜内巨噬细胞比例明显升高;Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)含量和mRNA表达水平明显升高;Th17细胞比例和IL-17A、IL-22、IL-17F含量明显升高;Treg细胞比例和IL-10表达明显升高。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一部分：比较分析不同基因遗传背景小鼠对DSS急性肠炎易感性的差异

1 前言

2 材料和方法

2．1 主要试剂和仪器

2．2 研究对象和分组

2．3 研究方法

3 结果

3．1 C57BL／6小鼠和BALB／c小鼠对DSS诱导肠炎反应敏感性不同

3．2 DSS急性肠炎C57BL／6小鼠和BALB／c小鼠肠黏膜内免疫细胞组成的比较

4 讨论

5 结论

第二部分：不同基因遗传背景小鼠炎症性肠病肠相关淋巴组织内Th17和Treg应答差异的比较

1 前言

2 材料和方法

2．1 主要试剂和仪器

2．2 研究对象和分组

2．3 研究方法

3 结果

3．1 FACS检测肠固有层中免疫细胞的组成

3．2 FACS检测肠系膜淋巴结中免疫细胞的组成

3．3 ELISA法检测肠固有层中细胞因子产生情况

3．4 Realtime PCR检测固有层与肠系膜淋巴结中细胞因子mRNA水平

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 Th17细胞及其相关细胞因子与炎症性肠病

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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