蟾蜍皮水提物对人肝癌细胞SMMC-7721生物学行为影响的实验研究

摘要

背景和目的：恶性肿瘤已成为危害人类健康的头号病症之一，常规的化疗、放疗及手术治疗对于控制大多数的癌症并不理想。肿瘤患者接受放疗、化疗杀灭肿瘤细胞的同时，由于多数抗肿瘤药物缺乏选择作用，对正常机体也有相当大的损伤，导致骨髓造血功能抑制、消化道反应、肝脏及肾脏等组织的损害、免疫功能下降等。中药配合放、化疗不但可以减轻其副作用，对肿瘤的疗效也有明显提高。单纯的局部客观症状缓解并不能全面反映中医药的疗效，带瘤生存，全身治疗，改善症状，提高生命质量是中医药抗癌的特色所在。因此对天然生物及植物药物有效成分的提取作为新的防癌剂，已成为当今科研工作者们最感兴趣的研究课题。本实验的研究目的是探讨蟾蜍皮水提物的体外抗肿瘤作用。中药抗肿瘤的作用机制是复杂的，不管是单味中药还是复方制剂，都含有多种成份，因此其作用不是单一的，它们可能具有多方面的作用。如何从多层次、多学科对中药抗肿瘤的作用机制进行客观、定性、定量的研究，以进一步揭示其奥秘，尚待中医药科学工作者的不断努力。相信，以数千年中医药理论和实践经验为基础，结合现代药物理论和生物技术，中药的抗肿瘤作用机制研究和临床应用将会有很大的发展。 方法： 1．细胞培养：肝癌细胞SMMC-7721于含10％新生牛血清、100U/ml青霉素链霉素的DMEM培养培养液中，在37°C、5％CO2、饱和湿度条件下，于CO2培养箱中进行培养。 2．MTT比色实验：选择在对数生长期生长良好的细胞，制成单细胞悬液，接种细胞于96孔培养板中，其中设空白对照组不加受试细胞。培养24小时后，药物组加入不同浓度的蟾皮水提物，阴性对照组加入等体积的DMEM培养液，于加药后第4小时、8小时、16小时、24小时、48小时、72小时加入MTT检测，求出OD值。 (1)Y轴为细胞存活率，X轴为测定时间，制作4-72小时的细胞生长曲线。 (2)利用公式计算细胞24小时、48小时、72小时的细胞增殖抑制率。 (3)通过EXCEL画图法做趋势线来求24小时、48小时、72小时IC50值。 3．集落形成实验：收集对数生长期细胞，接种于六孔板，200个细胞/孔，通过两种方法检测集落形成的情况。设药物组，加入低、中、高浓度的药物。阴性对照组，加入等体积的DMEM培养液。检测药物作用于肝癌细胞48小时后的集落形成情况。 4．转移小室实验：药物作用细胞24小时后，转入小室内，CO2孵箱内培养24小时，将小室取出，通过染色、脱水等步骤，将小室底部的膜沿壁切下，中性树胶封片，在光镜下，每个膜分别计数5个视野的穿膜细胞数，求得单个视野的平均穿膜细胞数。 结果： 1．MTT结果 (1)增殖抑制率结果：药物浓度为0.03125mg/ml、0.0625mg/ml、0.25mg/ml时，作用24小时后，对肝癌细增殖抑制率为13％、20％、53％；作用48小时后，抑制率分别为22％、37％、68％；作用72小时后，抑制率为58％、75％、82％。与阴性对照组组相比，效果显著(P<0.05)。 (2)生长曲线结果：生长曲线显示药物组细胞生长缓慢。 (3)(IC50)值：药物作用于肝癌细胞24小时的(IC50)值为0.2176mg/ml：48小时为0.0655mg/ml；72小时为0.0237mg/ml。 2．集落形成率的测定结果：0.005mg／ml药物作用48小时后，去含药培养液，常规培养6天，其集落形成率为12.4％。常规培养5天后，加入不同浓度的药物作用48h后去药物，继续常规培养3天，其集落形成率为14.3％，与对照相比其集落形成率和集落形成抑制率有显著差异(P<0.01)。 3．Transwell小室结果：浓度的蟾皮水提物作用24小时后，其穿膜数为25.31，与对照组相比，差异具有显著性(P<0.01)。 结论： 相同浓度的药物作用于肝癌细胞，随着时间的延长，增殖抑制率随之上升。相同的作用时间，随着药物浓度的增加，增殖抑制率随之上升，呈现出时间浓度依赖性。且低浓度的蟾皮水提物作用肝癌细胞48小时即能抑制其集落形成；作用24小时能抑制其侵袭活性。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述 中医药防治肝癌的研究进展

致谢