羽扇豆醇对人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞生物学行为的影响

摘要

目的：体外探讨羽扇豆醇对人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞生物学行为的影响。
　　方法：
　　1、收集采用普通培养基贴壁培养的肝癌细胞，然后使用无血清培养基悬浮培养得到所需人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞。
　　2、使用流式细胞仪检测不同浓度羽扇豆醇（0、20、40、60μmol/L）作用下人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞的细胞凋亡率和细胞周期的分布。
　　3、使用不同浓度羽扇豆醇（0、20、40、60μmol/L）作用于人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞，分别于24h、48h、72h，用MTS法检测羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞增殖的影响。
　　4、使用不同浓度羽扇豆醇（0、20、40、60μmol/L）作用于人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞，使用Transwell小室，于24h观察羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞侵袭、迁移能力的影响。
　　5、将 SMMC-7721干细胞样细胞置于含不同浓度羽扇豆醇（0、20、40、60μmol/L）的悬浮培养基中，于5-7天观察羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞成球能力的影响。
　　6、将SMMC-7721干细胞样细胞置于含不同浓度羽扇豆醇（0、20、40、60μmol/L）的无血清培养基中，分别于20min、40min、60min时观察羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞的细胞-基质粘附性的影响。
　　结果：
　　1.肝癌干细胞样细胞的凋亡和细胞周期的流式检测结果
　　FCM结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞48小时后，0、20、40、60μmol/L浓度组，细胞凋亡率分别为2.24±0.42％、16.27±2.4%、3.96±2.42%、27.37±1.93%，用药组与对照组比较凋亡率增加(P<0.05)。细胞周期结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞48h后，细胞周期的分布与药物浓度无明显相关，G0/G1期变化不明显，0、20、40、60μmol/L浓度组分别为36.78±0.68、36.36±0.86、36.52±0.70、36.66±0.38，用药组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；S期变化不明显，0、20、40、60μmol/L浓度组分别为27.58±1.81、27.82±1.33、27.50±0.90、28±0.32，用药组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；G2/M期无明显变化，0、20、40、60μmol/L浓度组分别为35.26±1.27、35.42±0.93、35.58±0.89、35.34±0.35，用药组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　2.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞增殖能力比较
　　MTS结果显示在浓度为20、40、60μmol/L的羽扇豆醇作用24h后， SMMC-7721肝癌干细胞样细胞抑制率分别为12.05%、23.37%、30.46%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；48h后细胞抑制率分别为17.09%、26.74%、35.08%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；72h后细胞抑制率分别为22.13%、33.23%、44.83%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；同一浓度不同时间比较，随时间延长，抑制率增加，三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
　　3.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞侵袭能力比较
　　显微镜观察结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞24小时后，20、40、60μmol/L浓度组，细胞侵袭抑制率分别为22.48%、27.54%、41.00%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　4.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞迁移能力比较
　　显微镜观察结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞24小时后，20、40、60μmol/L浓度组，细胞迁移抑制率分别为18.81%、31.93%、45.05%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　5.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞成球数量比较
　　显微镜观察结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞5-7天后，20、40、60μmol/L浓度组，细胞成球抑制率分别为27.03%、36.49%、58.11%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　6.不同浓度羽扇豆醇处理后的细胞-基质粘附性比较
　　显微镜观察结果结果显示浓度为20、40、60μmol/L的羽扇豆醇作用20min后，SMMC-7721肝癌干细胞样细胞粘附抑制率分别为5.07%、20.96%、40.96%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；40min后粘附抑制率分别为6.53%、27.50%、40.17%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；60min后粘附抑制率分别为16.85%、29.15%、46.94%，用药组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；同一浓度不同时间比较，随时间延长，抑制率增加，三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：
　　1.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞具有促凋亡作用，促凋亡作用具有浓度依赖性。但其对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的细胞周期无明显影响。
　　2.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的生长具有抑制作用，抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。
　　3.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的侵袭能力具有抑制作用，抑制作用具有浓度依赖性。同时对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的迁移能力具有抑制作用，抑制作用具有浓度依赖性。
　　4.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的成球能力具有抑制作用，抑制作用具有浓度依赖性。
　　5.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的粘附能力具有抑制作用，抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。

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前言

材料与方法

1主要材料

2实验方法和步骤

结果

1.肝癌干细胞样细胞的凋亡和细胞周期的流式检测结果

2.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞增殖能力比较

3.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞侵袭能力比较

4.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞迁移能力比较

5.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞成球数量比较

6.不同浓度羽扇豆醇处理后的细胞-基质粘附性比较

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述: 原发性肝癌干细胞及羽扇豆醇研究进展

致谢

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