液相色谱—串联质谱技术在动物源性食品兽药残留检测中的应用研究

摘要

食品安全问题具有风险程度高、敏感程度高、关注程度高等特点，历来是世界各国贸易争执的聚焦点。以我国出口食品为例，日本、欧盟等发达国家或地区定期都会针对我国不符合其技术规范要求（主要是食品安全要求）的食品采取通报、退货、销毁、增大抽样力度甚至全面停止从中国进口该类商品等措施。在中国加入WTO时间超过十年的今天，我们仍然可以看到不少食品因被检出硝基呋喃而遭到废弃、退货等。检测方法也是技术性措施之一，建立一种快速响应国外技术法规调整的机制，并以国外检测方法等效评价标准来确定检测方法更具有深远意义。等效检测方法标准在解决国际贸易争端中作用将会越来越重要，欧盟和美国等发达经济体都在不遗余力的制定并推广自己的检测方法标准评价体系，因为规则制定者将是今后政策走向的决定者，我国也应重视检测方法标准评价体系的研究和制定，或是可以倡导建立国际范围内适用的检测方法标准评价体系，以增强我国在国际规则制定中的话语权，这将极大丰富我国应对国际贸易争端的技术手段。
　　 本论文主要致力于对鳗鱼、龙虾、肠衣、蛋、蜂蜜等动物源性食品中的氯霉素、硝基呋喃类和四环素族液相色谱串联质谱分析方法的研究。
　　 1、采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)联用技术检测了肠衣、蜂蜜中的氯霉素残留。样品中的氯霉素在碱性条件下，用乙酸乙酯提取，提取液氮气吹干后，残渣用乙腈+水溶解，经正己烷液液分配脱脂。液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。氯霉素的定量限可定为0.1μg/kg。三次制作的基质校正曲线，每个点偏离校正曲线都小于10％，校正曲线相关系数均大于0.99，且添加浓度0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.4μg/kg（对应溶液浓度为0.05 ng/mL、0.1 ng/mL、0.2 ng/mL）均在线性范围内。重复性RSD＜43％。定量方法在浓度水平p(p＜1μg/kg)时回收率范围为-50％～+20％。API4000 Q-TRAP质谱仪和API4000+质谱仪回收率结果差异小，稳健性好。
　　 2、采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)联用技术检测了龙虾中的硝基呋喃残留。龙虾中残留的硝基呋喃类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，乙酸乙酯二次提取，电喷雾离子化，液相色谱-串联质谱检测。用同位素标记的内标法定量。四种硝基呋喃代谢物的定量限均可定为0.5μg/kg。重复性RSD值＜43％对龙虾基质添加0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg3个浓度水平，每个浓度水平进行2次平行试验，同一人进行3次重复试验，满足定量方法在分析物质量分数为10μg/kg时重复性RSD值＜21％要求。
　　 3、采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)联用技术检测了鳗鱼、蜂蜜、鸡中的四环素族残留。试样中四环素族抗生素残留物用0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液（pH为4.0±0.05）提取，经过滤和离心后，上清液用HLB固相萃取柱净化，高效液相色谱-质谱/质谱仪测定，基质外标峰面积法定量。四环素类兽药的定量限均可定为10.0μg/kg。配制6个点(J-std0、5.0、10.0、20.0、40.0、100 ng/mL)的基质标准溶液，三次制作的基质校正曲线，每个点偏离校正曲线都小于10％，相关系数均大于0.99，且添加浓度10.0μg/kg、20.0μg/kg、40.0μg/kg（对应溶液浓度为10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、40.0 ng/mL）均在线性范围内。

目录

声明

摘要

缩略语

第1章 引言

1．1 概述

1．1．1 出口动物源性食品面临的困难和问题

1．1．2 我国食品安全技术法规和标准现状

1．1．3 承接技术法规要求的检测技术面临新的挑战

1．2 本研究的目的意义、主要内容和创新性

1．2．1 本研究的目的意义

1．2．2 本研究的主要内容

1．2．3 本研究的创新性

第2章 液相色谱-串联质谱法检测动物源食品中氯霉素残留

2．1 概述

2．1．1 基本理化性质

2．1．2 结构式

2．1．3 作用机理

2．1．4 相关检测标准

2．2 实验部分

2．2．1 仪器与试剂

2．2．2 样品处理

2．2．3 色谱和质谱条件

2．3 方法学评价

2．3．1 特异性

2．3．2 确定定量限

2．3．3 校正曲线及线性范围

2．3．4 精密度/重复性

2．3．5 稳定性

2．3．6 基质效应

2．3．7 正确度

2．3．8 稳健性试验

2．4 实际样品检测情况

2．5 本章小结

第3章 液相色谱-串联质谱法检测动物源食品硝基呋喃残留

3．1 概述

3．1．1 基本理化性质

3．1．2 结构式

3．1．3 作用机理

3．1．4 相关检测标准

3．2 实验部分

3．2．1 仪器与试剂

3．2．2 样品处理

3．2．3 色谱和质谱条件

3．3 方法学评价

3．3．1 特异性

3．3．2 确定定量限

3．3．3 校正曲线及线性范围

3．3．4 精密/重复性

3．3．5 稳定性

3．3．6 基质效应

3．3．7 正确度

3．3．8 稳健性试验

3．4 方法实际运用情况

3．5 本章小结

第4章 液相色谱-串联质谱法检测动物源食品四环素族残留

4．1 概述

4．1．1 基本理化性质

4．1．2 结构式

4．1．3 作用机理

4．1．4 相关检测标准

4．2 实验部分

4．2．1 仪器与试剂

4．2．2 样品处理

4．2．3 色谱和质谱条件

4．3 方法学评价

4．3．1 特异性

4．3．2 确定定量限

4．3．3 校正曲线及线性范围

4．3．4 精密度/重复性

4．3．5 稳定性

4．3．6 基质效应

4．3．7 正确度

4．3．8 稳健性试验

4．4 方法实际运用情况

4．5 本章小结

第5章 结论

致谢

参考文献

个人介绍

攻读学位期间的研究成果