香芹酚对成熟鼠脊髓胶状质神经元谷氨酸能自发性兴奋性传递的作用

摘要

目的：以香芹酚为主要成分的牛至精油具有许多药理作用，其中包括抗痉挛和镇痛作用。虽然已有研究表明口服香芹酚具有镇痛的效果，但是这种作用的细胞机制尚不明确。为了明确其中机制，我们利用全细胞膜片钳技术检测香芹酚对成年雄性大鼠脊髓胶状质（substantia gelatinosa，SG; laminaⅡ of Rexed神经）细胞的谷氨酸能自发性兴奋性传递的影响。
　　方法：用乌拉坦向成熟雄性SD大鼠（6-7周）施以全身麻醉(1.2 g/kg，腹腔注射)，随后行腰骶部椎板切除术。取出腰骶部的脊髓(L1-S3)，利用振动微切片机切取600-800微米(μm)厚度的脊髓切片，放置于标本记录槽内的尼龙网托上。然后利用盲法全细胞膜片钳技术记录SG神经元的生物电信号。用含有香芹酚或其他药物成分的溶液灌注记录槽。
　　结果：保持维持电位在-70 mV时，对SG神经元灌注香芹酚(1 mM/L)两分钟时后，可诱导产生外向电流或增加SG细胞自发性兴奋性突触后电位(sEPSC)的频率或者同时诱导产生外向电流和增加sEPSC频率。另一方面，灌流香芹酚两分钟呈剂量-依赖关系增加sEPSC的频率和外向电流幅度，EC50分别为0.69 mM和0.55 mM。香芹酚增加sEPSC频率和产生外向电流的效果是可逆的。香芹酚增加sEPSC频率的能力能被TRPA1通道拮抗剂HC-030031抑制但不能被TRPV1通道的拮抗剂抗辣椒素抑制，结果显示抗辣椒素不能影响香芹酚增加sEPSC频率的能力。外向电流的电流-电压关系曲线表明此过程中存在钾离子和其他离子的细胞膜渗透率的改变。产生的外向电流能被10 mM-K+阻断。钾通道阻滞剂TEA和Ba2+对外向电流无作用。
　　结论：香芹酚能激活神经末梢的TRPA1通道而非TRPV1通道，引起神经末梢L-谷氨酸的自发性释放增加。它同时也能引起SG神经元的细胞膜电位超极化。这种超极化是由对TEA和Ba2+不敏感的钾离子通道介导产生。这表明香芹酚导致的神经细胞膜电位超极化可能是它产生镇痛效果的机制。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 动物

2．1．2 试剂和药品

2．1．3 脊髓片制作仪器

2．1．4 记录和刺激装置

2．1．5 数据记录和分析仪器

2．1．6 其它

2．2 脊髓片的制作方法

2．3 电生理记录

2．4 统计学处理

第3章 结果

3．1 香芹酚对SG神经元的作用效果

3．2 香芹酚对SG神经元作用效果的可重复性

3．3 香芹酚诱导的外向电流和sEPSC频率的增加有浓度依赖性

3．4 阻断剂存在时香芹酚对SG神经元自发性兴奋性传递的影响

3．5 香芹酚引起的电流的离子成分分析

3．6 钾离子通道阻滞剂对香芹酚电流的影响

第4章 讨论

4．1 香芹酚与SG神经元

4．2 TRPA1

4．3 TRPV1

4．4 香芹酚激活神经末梢的TRPA1通道

4．5 香芹酚产生外向电流

4．6 香芹酚激活SG的TRPA1通道并产生外向电流的临床意义

4．7 小结

第5章 结论与展望

5．1 结论

5．2 进一步工作的方向

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 慢性胰腺炎的疼痛治疗