HER-2受体放射性配体99Tcm-TP1623的制备、鉴定及其在正常动物体内的分布研究

摘要

研究背景及目的:
　　原癌基因人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)是乳腺癌独立的预后指标,大量临床研究显示,其高表达与患者的预后差、病情进展快、对放、化疗耐药密切相关。HER-2也是针对乳腺癌生物治疗的第一个靶基因,迄今,HER-2的分子影像诊断及靶向治疗一直仍是乳腺癌研究的热点。
　　与临床常规HER-2免疫组化测定相比,HER-2的放射配体结合显像具有如下明显优势:1)HER-2在肿瘤内表达具有不均一性,分子显像可克服免疫组化局部取才的局限性。2)在体内显像,便于疗效观察和随访。3)所显示的是具有生物活性的HER-2表达,能更准确、真实反映机体情况,而免疫组化所测得的HER-2表达仅为为免疫活性含量。
　　B2-S22-AFA是一种人工合成的表皮生长因子模拟肽,能够高选择性与HER-2受体特异性结合,通过阻断HER-2受体作用,抑制体内众多生长因子与HER-2受体结合间二聚体的形成,明显抑制过度表达HER受体尤其是过度表达HER-2的乳腺癌细胞的生长。本研究采用间接法对 HER-2模拟肽 B2-S22-AFA进行99Tcm标记(产品简称99Tcm-TP1623),筛选出标记的最佳条件、鉴定标记物的理化性质,研究其在正常动物体内组织动态分布特点,为HER-2为靶点的受体显像研究奠定基础。
　　方法:
　　1.99Tcm-TP1623的制备:化学合成制备TP1623,并以氯化亚锡为还原剂进行99Tcm标记,纸层析法测定标记率,计算比活度。
　　2.99Tcm-TP1623的理化与生物学性质鉴定:体外稳定性实验、血清蛋白结合实验和脂/水分配实验,SephadexG50柱层析测定放化纯度等。
　　3.健康小鼠体内分布实验:按随机数字表法将28只健康昆明小鼠分为7组,每组4只。经尾静脉注射99Tcm-TP1623溶液100μl?3.7 MBq,分别于1、5、10、30、60、120、240 min处死,收集血液(断头取血)、心、肺、肝、肾、肠、肌肉、骨、脑,分别称重并测量其放射性,经参考源校正后计算每克组织百分注射剂量率(％ID/g)。绘制小鼠体内各脏器、组织放射性分布图。
　　4.健康大耳兔 SPECT显像研究:健康雄性大耳兔于仰卧位固定于实验台上,将探头视野中心对准兔胸腹部。经耳缘静脉注射99Tcm-TP1623溶液74MBq?200μl,立即以1帧/s连续采集1 min,然后以1帧/1min连续采集59min,此后于1.0、2.0及3.5 h分别预置计时5.50min、6.70 min、7.63min采集1帧图像,动态观察胸腹部各主要组织器官的放射性分布变化。
　　结果:
　　1.99Tcm-TP1623的制备:化学合成 TP1623的纯度为>95%,99Tcm-TP1623的标记率及放射化学纯度(radiochemical purity, RCP)均>95%,直接法计算其比活度为(24.35±0.06)TBq/mmol。
　　2.生物学与理化性质的鉴定:将标记多肽于室温下放置6 h以后,其RCP仍可达到为(95.03±0.97)%;Sephadex G50柱层析见一小比例血清蛋白结合峰(18.5%);油/水分配系数P为―(2.51±0.15)。
　　3.健康小鼠体内分布实验:注射后初期,标记多肽放射性主要分布于血液、心脏、肺和肝脏,随时间迅速下降;肾脏放射性呈持续高水平;肠道放射性随肝脏放射性降低而渐有所升高;骨、肌肉放射性分布低,并随时间延长组件减低;脑组织持续最低放射性分布。
　　4.健康大耳兔 SPECT显像研究:血池影消退迅速,放射性主要通过肾脏清除,部分经肠道清除,胃区、颈部未见明显放射性浓聚,脑呈低放射性本底影。
　　结论:
　　1.本研究成功制备99Tcm-TP1623,其标记率及放化纯度高(>95%),稳定性好,6小时内放化纯度无明显变化。标记方法简便,常温下即可完成,无需分离纯化可直接应用,可制备成一步法标记冻干试剂盒。
　　2.99Tcm-TP1623血清蛋白结合率较低,在血液中清除速度快。肌肉、骨骼放射性分布较其他脏器明显低,脑组织基本无放射性分布。主要通过泌尿系统排泄,具有优良的体内显像的动力学特性。
　　3.本课题为应用该分子探针进行 HER-2受体阳性荷瘤动物显像研究奠定了重要基础。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 99Tcm-TP1623的制备及鉴定

2.1 99Tcm-TP1623的制备

2.1.1 实验材料

2.1.2 实验方法

2.1.3 实验结果

2.2 99Tcm-TP1623的理化与生物学性质鉴定

2.2.1 实验材料

2.2.2 实验方法

2.2.3 实验结果

2.2.4 讨论

第3章 99Tcm-TP1623的动物体内实验研究

3.1 99Tcm-TP1623在健康小鼠体内的分布研究

3.1.1 实验材料

3.1.2 实验方法

3.1.3 实验结果

3.2 99Tcm-TP1623在健康大耳兔体内的SPECT显像研究

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验方法

3.2.3 实验结果

3.2.4 讨论

第4章 全文结论

第5章 展 望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述