miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转分化的调控及信号机制

摘要

目的：
　　通过高糖诱导构建人脐静脉内皮细胞间质转分化模型，探讨 miR-328在内皮细胞间质转分化中的调控作用以及MEK1/2-ERK1/2信号通路在其中的作用。
　　方法：
　　培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），高糖诱导间质转分化；构建携带miR-328和antagomiR-328基因的重组慢病毒，转染HUVECs。将实验分为九组：①：HUVECs+正常葡萄糖(5.5mmol/L)，②：HUVECs+甘露醇对照组(30mmol/L)，③：HUVECs+高浓度葡萄糖(30mmol/L)，④：HUVECs+miR-328，⑤：HUVECs+miR-328病毒阴性对照，⑥：HUVECs+高浓度葡萄糖+antagomiR-328，⑦：HUVECs+高浓度葡萄糖+antagomiR-328病毒阴性对照，⑧:HUVECs+高浓度葡萄糖+U0126（10μmol/L），⑨：HUVECs+miR-328+U0126（10μmol/L）。免疫荧光双染色鉴定 HUVECs发生间质转分化； RT-PCR检测miR-328表达水平；Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白，p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平。
　　结果：
　　1.免疫荧光双染色结果显示，经高糖处理的HUVECs呈CD31、α-SMA染色双阳性；
　　2.与正常葡萄糖组相比，高糖组miR-328表达明显增高（p＜0.05），差异具有统计学意义；与高糖组及miR-328组相比，经U0126处理后miR-328表达明显降低（p＜0.05），差异有统计学意义；
　　3.与正常葡萄糖组相比，高糖及miR-328处理的HUVECsⅠ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显增多（p＜0.05），差异具有统计学意义；与高糖组相比，antagomiR-328组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显减少（p＜0.05），差异具有统计学意义；与高糖组及miR-328组相比，经U0126处理后Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显减少（p＜0.05），差异具有统计学意义；
　　4.与正常葡萄糖组相比，高糖及 miR-328处理的 HUVECs， p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平明显增高（p＜0.05），差异具有统计学意义；与高糖组相比，经 antagomiR-328处理的 HUVECs， p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平明显降低（p＜0.05），差异具有统计学意义，经过 U0126处理后 p-MEK1/2、p-ERK1/2水平较高糖组明显降低（p＜0.05），差异具有统计学意义。
　　结论：
　　（1）高糖可诱导HUVECs发生间质转分化，同时miR-328表达增高；
　　（2）过表达miR-328可诱导HUVECs发生间质转分化，而antagomiR-328可抑制内皮细胞间质转分化；
　　（3）miR-328诱导HUVECs间质转分化和MEK1/2-ERK1/2信号通路有关。

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计学方法

第3章 结果

3.1 HUVECs的生长特点

3.2 慢病毒感染HUVECs结果

3.3免疫荧光双染色鉴定HUVECs间质转分化情况

3.4各组细胞miR-328相对表达量比较

3.5 Western blot检测各组细胞ⅠⅢ型胶原蛋白相对表达量比较

3.6 Western blot检测各组细胞p-MEK1/2、p-ERK1/2相对表达量比较

第4章 讨论

4.1心肌纤维化与糖尿病心肌病

4.2 内皮细胞间质转分化与心肌纤维化

4.3 miR-328与内皮细胞间质转分化

4.4 MEK1/2-ERK1/2信号通路与内皮细胞间质转分化

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

综述: miR-328在心血管疾病中研究的进展