紫苏子油的冷/热榨法提取及其对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

摘要

紫苏子为唇形科一年生草本植物紫苏(Perilla frutescens(L.) Britt.)的果实，是国内外经常用于临床上的一种中药，我国的紫苏资源丰富，全国各地均可见到，其分布较为广泛。紫苏子含油量非常丰富，且富含人体的必须脂肪酸α-亚麻酸，为充分开发利用紫苏子资源，本课题对紫苏子油提取工艺的优化、脂肪酸成分、抗氧化活性和抑制黄嘌呤氧化酶活性以及紫苏子油微乳的体外释放情况等方面进行了研究。主要的研究内容及结果如下：
　　（1）运用冷榨法和热榨法对紫苏子油进行提取，在单因素基础上选择水分含量、转速及榨头温度为自变量，紫苏子出油率为响应值，利用响应面分析法中的Box-Benhnken中心组合方法优化了紫苏子油的冷榨法提取工艺，结果表明其最佳工艺为：水分含量2.5％、转速25rpm、榨头温度60℃，在此条件下紫苏子油出油率实测值为34.28%，与预测值34.09%相近。
　　（2）利用气相色谱-质谱联用（GC-MS)对冷/热榨紫苏子油的脂肪酸成分进行分析比较，结果表明冷榨紫苏子油中检测出五种物质，分别为α-亚麻酸、油酸、亚油酸、棕榈酸和正十五烷酸。热榨紫苏子油中检测出α-亚麻酸、亚油酸和棕榈酸，不含油酸，且经高温蒸炒后产生了一些醇类及烷烃类物质。
　　（3）抗氧化剂对紫苏子油的抗氧化效果排序为叔丁基对苯二酚(TBHQ)>2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)>维生素E(VE)；添加了抗氧化效果最好的TBHQ后冷、热榨紫苏子油的货架期分别从176天和112天延长至480天和528天；复配抗氧化剂的使用对紫苏子油抗氧效果排序为0.01%TBHQ+0.01%BHT＞0.01%TBHQ+0.01%VE＞0.01%BHT+0.01%VE，添加了复配抗氧化剂TBHQ和BHT的冷、热榨紫苏子油其货架期分别从176天和112天增加到544天和560天；抗氧化增效剂对紫苏子油稳定性的影响结果表明：添加了0.015%TBHQ+0.005%CA对冷、热榨紫苏子油的抗氧化效果最好，其货架期分别由176天和112天延长至528天和544天。
　　（4）考察α-亚麻酸氧化动力学规律表明冷榨紫苏子油中α-亚麻酸的氧化规律较接近指数变化规律（R2=0.908），即符合一级氧化动力学；而热榨紫苏子油中α-亚麻酸的氧化规律更接近线性变化（R2=0.930），即符合零级氧化动力学。
　　（5）紫苏子油抗氧化活性中，冷/热榨紫苏子油均表现出较强的抗氧化活性，其中冷榨紫苏子油对三种自由基清除效果排序为：·OH＞ O2-·＞ DPPH·；热榨紫苏子油对三种自由基清除效果排序为： DPPH·＞ O2-·＞·OH。
　　（6）对冷/热榨紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的抑制作用和抑制动力学进行分析，实验结果表明冷/热榨紫苏子油均对黄嘌呤氧化酶有一定的抑制活性，随着紫苏子油浓度的增加抑制活性增大且冷榨紫苏子油的抑制效果更好。动力学分析可知冷/热榨紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的作用均属于竞争性抑制。冷/热榨紫苏子油的IC50分别为7.07mg/mL、10.56mg/mL，抑制常数Ki分别为2.86mg/mL、4.23mg/mL。
　　（7）以正向透析扩散法分别考察紫苏子油微乳体系在人工胃液和pH7.4人工肠液中的释放情况，并对释放情况进行拟合。结果表明：冷/热榨紫苏子油微乳在人工胃液及pH7.4人工肠液两种释放介质中的释放情况均符合Retger-peppas方程。人工胃液中冷/热榨紫苏子油微乳释放方程分别为Q=12.37324t-0.38437， Q=5.69875t-1.15531；pH7.4人工肠液中冷/热榨紫苏子油微乳的释放方程分别为：Q=1.03672t0.39456，Q=4.61072t0.16096。