Nek2A/SuFu负反馈调节Gli介导的Hedgehog信号通路

摘要

背景：
　　Hedgehog（Hh）信号通路是在研究果蝇基因突变遗传分析时发现的，对机体多种器官发育起着重要的作用。近年来越来越多的研究发现Hh信号通路与多种肿瘤的发生发展亦密切有关，比如基底细胞癌、非小细胞肺癌、膀胱癌和胰腺癌等。在级联Hh信号通路中，转录因子Gli是其级联传导的末点，因此，又有人称之为Hh/Gli信号通路。Suppressor of Fused(SuFu)是Hedgehog(Hh)信号通路最保守的关键组分之一，在Hh信号通路中发挥重要作用。有研究报道SuFu可以抑制Hh信号通路的活性，但其调节Hh信号通路的机制还不是很清楚。
　　Nek2A是丝氨酸/苏氨酸激酶Nek家族蛋白中的一员，主要调节细胞中的中心体。Nek家族蛋白主要有3种剪切形式，分别是Nek2A、Nek2B和Nek2C，在脊椎动物中主要以Nek2A和Nek2B两种剪切形式存在。由于Nek2在细胞有丝分裂以及癌症相关的信号转导通路中重要的调节作用，其已成为一个重要的致癌基因。在Nek2高表达的肿瘤中，患者表现出不良预后。
　　我们前期的研究发现NIMA相关表达激酶2A(Nek2A)与Hh信号通路抑制因子SuFu相互作用，鉴于Nek2A和SuFu在肿瘤中发挥的重要作用及他们之间的相互作用，研究Hh/SuFu/Nek2A之间的相互作用将会为解决人类疾病提供一个新的思路。
　　目的：
　　1、研究Nek2A对SuFu的调控机制；
　　2、分析Nek2A与Hh信号通路之间的相互作用；
　　3、阐明Gli1/2调控NEK2A的分子机制。
　　方法：
　　1、Western blot检测Nek2A对SuFu及Hh信号通路各组份蛋白表达的影响；
　　2、免疫共沉淀检测Nek2A对SuFu蛋白稳定性的影响；
　　3、Real-time PCR检测Nek2A对Hh信号通路各组分mRNA的影响；
　　4、双荧光素报告基因和染色质免疫共沉淀实验检测Gli1/2调控NEK2A转录的分子机制。
　　结果：
　　1、Western blot实验结果表明Nek2A抑制SuFu泛素化降解；
　　2、Western blot和Real-time PCR实验结果表明干扰Nek2A激活Hh信号通路；
　　3、Western blot和Real-time PCR实验结果表明Hh信号通路调节Nek2A；
　　4、双荧光素报告基因和染色质免疫共沉淀实验结果表明NEK2A是Gli1/2的靶基因。
　　结论：
　　Gli1/2直接激活NEK2A，增加的Nek2A蛋白与SuFu相互作用进而增加了SuFu的稳定性。SuFu随后抑制Gli1/2进入细胞核，反过来抑制了Gli1/2对NEK2A的转录激活功能。

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 前言

1.1 概述

第2章 Nek2A稳定SuFu

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

第3章 抑制Nek2A激活Hh信号通路

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

第4章 Hh信号通路调节Nek2A

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 实验结果

第5章 Gli1/2调节NEK2A的转录

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.3 实验结果

第6章 结论与讨论

6.1 结论

6.2 讨论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:Hh信号通路在发育和肿瘤中研究进展