来那替尼通过抑制HER2抑制骨肉瘤细胞恶性表型的体外研究

摘要

目的： 探讨体外来那替尼（Neratinib）是否通过抑制HER2的表达从而抑制人骨肉瘤细胞的增值、侵袭和迁徙，及其相关分子机制，为进一步研究来那替尼治疗骨肉瘤的分子机制奠定基础。 方法： 采用0，1，2，3，4，5μmol/L浓度的Neratinib作用人骨肉瘤细胞U2-OS和143B。 1、CCK8检测U2-OS和143B细胞增殖能力。 2、Wound healing实验用来检测细胞的迁徙能力。 3、Transwell invasion实验用来检测细胞的侵袭能力。 4、Western blot检测U2-OS和143B细胞中HER2、p-HER2（Tyrosine877）、Beclin-1、LC3B（Ⅱ、Ⅰ）、PI3K、p-AKT及AKT蛋白表达水平。 结果： 来那替尼能有效抑制U2-OS和143B细胞的增殖，且在24 h内呈剂量依赖型，24 h IC50（U2-OS）为2.431μmol/L，24 h IC50（143B）为2.966μmol/L。 来那替尼处理组细胞的迁徙和侵袭力均显著低于对照组(P＜0.05)。 来那替尼处理组细胞中HER2、p-HER2、Beclin-1、PI3K、p-AKT蛋白表达水平及LC3B（Ⅱ/Ⅰ）比率均显著低于对照组(P＜0.05)。 结论： 1、骨肉瘤U2-OS和143B细胞中的HER2基因被沉默后，其部分生物学特征明显发生了改变，如：细胞的增殖、侵袭、迁移能力均被抑制。 2、来那替尼能够抑制U2-OS和143B细胞中的Beclin-1蛋白表达及LC3B（Ⅱ/Ⅰ）比率。 3、来那替尼能够抑制U2-OS和143B细胞中的HER2-PI3K/AKT信号通路。

目录

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1试剂与设备

2.1.1实验细胞株

2.1.2 主要的实验试剂

2.1.3 主要的实验设备

2.1.4 主要的试剂配制

2.2 实验方法

2.2.1 细胞培养

2.2.2 CCK8实验检测细胞增殖

2.2.3 qPCR检测Neratinib处理后U2-OS和143B细胞HER2 mRNA的表达

2.2.4 Wound healing 迁徙实验

2.2.5 Transwell侵袭实验

2.2.6 Western-blot检测细胞蛋白的表达

2.2.7统计学分析

第3章 结果

3.1 CCK8检测细胞增殖

3.2 qPCR检测HER2基因的表达

3.3 Neratinib对细胞迁移能力的影响

3.4Neratinib对细胞侵袭能力的影响

3.5 Neratinib对细胞蛋白表达的影响

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:骨肉瘤最新研究进展