直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌

摘要

该研究首先根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物,建立了检测沙门氏菌的聚合酶链反应(PCR)技术.对沙门氏菌属A-F各群中共15株沙门氏菌标准菌株、27株沙门氏菌现场分离菌株和其他10株非沙门氏菌菌株进行PCR扩增,结果沙门氏菌均显示出495bp特异性DNA扩增条带,而所有对照均不出现特异条带,因此,此方法具有很强的沙门氏菌属特异性.PCR产物测序结果与已知序列一致,用测序产物作探针,通过班点印迹实验(dot-blot)进一步验证PCR的特异性.PCR敏感性试验显示,该体系能检出14pg以上的沙门氏菌DNA;当沙门氏菌和大肠杆菌按不同比例混合后,直接ELISA方法和PCR方法的检测比较试验结果显示,在沙门氏菌:大肠杆菌为1:100时,用ELISA法和PCR法均能检测出阳性样品,在沙门氏菌:大肠杆菌为1:1000时,用ELISA法检测为阴性,而用PCR法则能检测出.通过对5种不同的DNA模板提取方法的比较,选定了操作简便、快速、费用低廉的热裂解法.在沙门氏菌属特异性单抗试剂盒研究的基础上,将PCR法和单抗试剂盒两种快速检测方法进行了比较研究.对城区141份水样进行直接ELISA法检测,阳性样品和随机挑选的部分ELISA结果阴性样品,进行PCR扩增,结果直接ELISA和PCR的符合率达97.2％.通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试,最终确定较优化的沙门氏菌检测程序,即:对大量样品采用直接ELISA筛检,除去大量阴性样品,阳性样品采用PCR法作进一步鉴定;需要定型时则用国标方法.此法具有高度的特异性、敏感性和快速简便等优点,且易于推广,为常年需处理大量样品的防疫部门、动检、食品饲料监测等部门提供一种有效的检测手段.既可保证样品检测的准确性和可靠性,又可节省大量的人力、物力和财力,有较大的社会经济效益.

目录

符号说明

前言

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

3讨论

参考文献

攻读学位期间发表、录用的论文

附件

致谢