牛γ干扰素基因cDNA的克隆、表达及其表达产物单克隆抗体的研制

摘要

本研究通过rBovIFN-γ的原核表达及其真核表达质粒的构建，以期研制rBovIFN-γ及其McAb，为进一步研究rBovIFN-γ及其McAb在牛病诊断、防制、治疗及其相关研究中的应用奠定基础。1.rBovIFN-γ在大肠杆菌中的表达及其产物的鉴定　　根据BovIFN-γ基因的已知序列，通过RT-PCR扩增出BovIFN-γ前体(PreBovIFN-γ)的cDNA序列(包含信号肽序列)，然后将其定向克隆入pVAX1质粒中，构建重组质粒pVAX1-PreBovIFN-γ。 通过PCR从重组质粒中扩增出成熟BovIFN-γ的DNA序列，并将后者定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1，经DNA测序确认后，分别转化E.coliBL21和E.coliBL21(DE3)，经IPTG诱导，各自表达出大小在22KD和42KD左右的融合蛋白。本研究为进一步研究rBovIFN-γ单抗在研究牛免疫细胞功能、牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

第一章文献综述：抗原特异性IFN-γ试验在结核病控制中的应用研究进展

1.抗原特异性IFN-γ试验

2.抗原特异性IFN-γ试验在LTBI诊断中的应用

3.抗原特异性IFN-γ试验在HIV-TB共感染患者中的应用

4.抗原特异性IFN-γ试验在活动性TB预后中的应用

5.抗原特异性IFN-γ试验在判断结核病灶活动情况及抗结核治疗效果方面的应用

6.抗原特异性IFN-γ试验在发展中国家的应用

7.新型TB特异性抗原在抗原特异性IFN-γ试验中的应用

8.抗原特异性IFN-γ试验在牛TB诊断中的应用

9.结论和展望

参考文献

第二章重组牛IFN-γ在大肠杆菌中的表达及其产物的鉴定

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

参考文献

第三章重组牛IFN-γ单克隆抗体的制备与初步鉴定

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

参考文献

附录：重组质粒pET-30a(+)-BovIFN-γ的DNA序列测定报告

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文