IMS-PCR检测食品中的单增李斯特菌

摘要

单增李斯特菌是自然界中一种常见的致病菌，能感染人类和动物；李斯特菌病是具有高致死率的一种疾病。因此，采用科学的方法检测食品中是否含有单增李斯特菌就显得非常重要。本文利用IMS-PCR法能快速、简便地从食品中检测出单增李斯特菌。 免疫磁珠法(Immunomagnetic Separation简称IMS法或Listertest法)是利用抗原抗体反应的原理，做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验；PCR(Polymerase Chain Reaction)法是针对单增李斯特菌的iap基因(编码p60蛋白)设计特异性引物，进行PCR扩增反应；做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验。通过对这两种方法的分析和比较，建立IMS-PCR法，利用PCR法的引物，做单增李斯特菌的特异性和敏感性实验。同时，国标法(检测的标准方法)和实时荧光定量PCR法(试剂盒)作为IMS-PCR法的对照，同IMS-PCR法实验结果进行分析和比较。 IMS法：能快速捕集细菌，在培养液中进行增菌(37℃ 14～18h)；通过溶血反应和鼠李糖反应确认是否为单增李斯特菌，需要3～7天，敏感性能达到10-7。PCR法：从食品中获取单增李斯特菌到进行增菌培养要3～5天，提取细菌基因组DNA，并对其进行了PCR扩增，结果得到片段的长度为230bp，需要4h就得出结果，敏感性能达到10-5。IMS-PCR法：从快速捕集细菌到进行增菌培养，再经PCR扩增后得到片段长度为230bp；只需在1天内就能检测出单增李斯特菌，缩短了检测的时间；同时提高单增李斯特菌检测的特异性和敏感性。IMS-PCR法的实验结果与国标法和实时荧光定量PCR法(试剂盒)法的结果相符，然而它比国标法简便、快速、灵敏度高，比实时定量PCR(试剂盒)法价格低；因此从经济和实用性上，IMS-PCR法有很好的应用前景和研究价值。

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第一章文献综述

1.1单增李斯特菌

1.1.1简介

1.1.2生物学特性

1.2亚分型

1.2.1 LM的传统表型亚分型法

1.2.2 LM的遗传亚分型

1.3毒力及对理化因素的抵抗力

1.3.1毒力

1.3.2对理化因素的抵抗力

1.4流行病学

1.4.1自然界分布

1.4.2食品污染

1.4.3易感人群

1.5临床表现

1.6 LM的检测

1.6.1传统分离培养检测及鉴定方法

1.6.2显色培养基快速鉴定技术

1.6.3数值分类鉴定和新型计数技术

1.6.4免疫检测技术

1.6.5分子检测技术

1.6.6现阶段检测单增李斯特菌存在的问题

1.6.7展望

1.7本文的研究内容

第二章材料和方法

2.1材料

2.1.1菌株

2.1.2仪器与试剂

2.2方法步骤

2.2.1国标法

2.2.2免疫磁株法

2.2.3 PCR法

2.2.4 IMS-PCR法

2.2.5 RealTime PCR法

第三章结果与分析

3.1实验结果

3.1.1国标法实验结果

3.1.2菌落计数

3.1.3免疫磁株法实验结果

3.1.4 PCR法实验结果

3.1.5 IMS－PCR法实验结果

3.1.6 RealTime PCR法实验结果

3.2实验分析

3.2.1 IMS法

3.2.2 PCR法

3.2.3 IMS-PCR方法

3.2.4展望

第四章结论

参考文献

致 谢