唑来膦酸单药及其联合顺铂抑制肺癌A549细胞增殖的机制研究

摘要

目的：1、观察唑来膦酸单药对肺癌A549细胞增殖的影响。2、观察唑来膦酸和顺铂联合应用是否有协同效应，给药顺序(序贯VS同时)的不同是否会影响协同抗肿瘤的疗效，明确最佳的给药顺序，为其成为防治肿瘤的药物及其临床用药提供实验依据。3、探讨唑来膦酸临床可能的直接抗肿瘤作用机制。
　　 方法：1.实验分组：(1).空白对照组(2).单药唑来膦酸组(3).单药顺铂组(4).同时唑来膦酸和顺铂组(5).顺铂序以唑来膦酸组(6).唑来膦酸序以顺铂组2.以MTT法观察0 umol/L～200 umol/L10个阶梯浓度的单药唑来磷酸24小时、48小时、72小时对肺癌A549细胞增殖的影响，以流式细胞术、Annexin-V/PI双染法和分光光度法分别检测浓度为0、1.56 umol/L、50 umol/L、100 umol/L的唑来膦酸作用肺癌A549细胞24小时后对细胞周期、细胞凋亡和Caspase-3活性的影响。3.以MTT法、Annexin V-FITC/PI双染色法和分光光度法检测浓度为1.56 umol/L唑来膦酸和0.3215ug/ml顺铂不同顺序联合用药方式对肺癌A549细胞增殖、凋亡及其Caspase-3活性的影响。4.以RT-PCR技术检测单药唑来膦酸及其联合顺铂作用前后肺癌A549细胞MDC1、ERCC1、RAP80基因mRNA表达的变化。
　　 结果：1.肺癌A549细胞经不同浓度及其不同时间的单药唑来膦酸处理后，细胞增殖均受到不同程度的抑制(抑制率为8.0％±1.1％～93.0％±2.0％)，呈时间和剂量的依赖性，与对照组相比有显著差异(P<0.05)。1.56 umol/L、50 umol/L、100 umol/L的唑来膦酸作用24小时后细胞主要集中于S期，细胞凋亡率显著升高，其Caspase-3活性也显著升高，与空白对照组有显著差异(P<0.05)。2.联合唑来膦酸和顺铂各不同顺序用药组与空白对照组、单药唑来膦酸组及其单药顺铂组相比，生长抑制率和细胞凋亡率有显著性差异(P<0.05)，两药有协同作用，其以顺铂序以唑来膦酸组对肺癌A549细胞的生长抑制率最大(46.94±3.45)％和细胞的凋亡最高(36.53±1.31)％，作用强于其它顺序联合用药(P<0.05)。进一步研究显示各不同顺序联合组Caspase-3活性较空白对照组、单药唑来膦酸组及其单药顺铂组显著升高(P<0.05)，尽管顺铂序以唑来膦酸组升高最显著，但与唑来膦酸序以顺铂组和同时用药组没有统计学差异(P>0.05)。3.唑来膦酸单药及其联合顺铂处理后各组肺癌A549细胞目的基因MDC1和RAP80的mRNA的表达与对照组相比显著降低，各组间有统计学意义(P<0.05)，而基因ERCC1的mRNA表达无显著差异(P>0.05)。
　　 结论1.单药唑来膦酸可明显抑制肺癌A549细胞的增殖，诱导A549细胞凋亡，其机理可能与唑来膦酸升高Caspase-3活性有关。2.唑来膦酸和顺铂可协同抑制肺癌A549细胞增殖，诱导细胞凋亡，并以顺铂序以唑来膦酸组最为显著。3.单药唑来膦酸、联合顺铂的协同作用及其顺序依赖性可能与DNA修复相关基因MDC1和RAP80的mRNA表达降低有关，而与ERCC1mRNA表达没有关系。