甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长及XAF1基因表达影响的研究

摘要

目的：5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidin，5-Aza-CdR)是一种甲基转移酶抑制剂，体外实验研究表明5-Aza-CdR能抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡，在多种肿瘤细胞中促进不同肿瘤抑制因子高表达。XAF1是近年来研究发现的新型肿瘤抑制基因，因基因高甲基化在许多肿瘤细胞或组织中呈低表达。本研究旨在探明甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对于肺腺癌A549细胞增殖、凋亡等生物学行为及细胞中抑癌基因XAF1表达水平的影响，初步探讨甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长增殖的影响及可能机制。
　　 方法：本实验通过培养肺腺癌A549细胞，分别以1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷药物干预细胞，以此分为低浓度、中浓度、高浓度三组，并以相同体积的PBS、药物溶解介质干预细胞，分别作为空白组和对照组。分别于干预后24、36、48小时后采用MTT比色法检测细胞增殖情况变化，并于干预48h后用Annexin V/PI双染色法，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。并于干预后48h采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中XAF1mRNA的表达水平变化，采用蛋白免疫印记(Western Blot)检测细胞中XAF1蛋白表达水平变化：
　　 结果：MTT检测结果显示干预48h后1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L浓度组细胞增殖抑制率分别为0.35±0.03、0.53±0.04、0.64±0.02，较空白组及对照组明显增高(P<0.01)，空白组与对照组之间无统计学意义(P>0.05)，且同浓度组细胞增殖抑制率随药物作用时间延长而增高(P<0.05)，FCM检测结果显示三种不同浓度组细胞凋亡率分别为7.85％±1:1.39％、15.06％±2.07％、22.43％±2.45％，较空白组(5.06％±1.03％)及对照组(4.99％±1.08％)增高(P<0.05)，空白组与对照组之间无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L组XAF1mRNA表达水平分别为3.19±0.71、2.11±0.86、1.41±0.24较空白组(3.96±0.78)及对照组(3.99±0.41)增强(P<0.05)，高浓度组较低浓度组XAF1mRNA表达增强(P<0.05)，中浓度组与其他两组之间、空白组及对照组之间无统计学意义(P>0.05)；Western Blot结果显示三种不同浓度组的蛋白表达量分别为0.32±0.04、0.37±0.01、0.47±0.06较空白组(0.08±0.01)及对照组(0.09±0.03)增强(P<0.05)，高浓度组较低浓度组中XAF1蛋白表达增强(P<0.05)，中浓度组与其他两组之间无统计学意义(P>0.05)，空白组及对照组之间无统计学意义(P>0.05)。
　　 结论：甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肺腺癌A549细胞有增殖抑制和促进细胞凋亡的作用，同时上调A549细胞中抑癌基因XA目的表达水平，5-氮杂-2’-脱氧胞苷对A549细胞恶性生物学行为的这种逆转作用可能与其上调抑癌基因XAF1表达有关。