去甲基化剂诱导肺腺癌细胞RASSF1A基因表达及其对肺腺癌细胞生物学行为影响的研究

摘要

目的：RASSF1A是位于3p21．3区域的新犁抑癌基因,其启动子区的高甲基化导致该基因在某些肿瘤组织和肿瘤细胞中表达缺失。本研究用去甲基化剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肺腺癌细胞株A549,诱导高甲基化失活的抑癌基因RASSF1A重新表达并观察其对肺腺癌细胞生物学行为的影响。rn 方法：分别使用浓度为5×10-mol/L、5×10-mol/L、5×10-'mol/L的5-Aza-CdR处理肺腺癌细胞株A549,对照组细胞以PBS处理。rn 通过RT-PCR榆测处理后抑癌基因RASSF1A mRNA表达的改变,MTT法观察处理后细胞的生长活性,并应用流式细胞术进行细胞周期、凋亡率的分析。rn 结果：肺腺癌细胞株A549经不同浓度之5-Aza-CdR处理后,RASSF1A mRNA表达缺失的A549细胞检出基因重新表达mRNA,对照组A549细胞无RASSF1A mRNA表达：由MTT法绘制细胞生长曲线,5-Aza-CdR处理后的A549细胞与对照组相比,生长速度出现不同程度减慢。rn 5-Aza-CdR处理后细胞无明显的G1、G2期改变；A549细胞凋亡率由4．2%增至12．3%、15．9%和19．5%。不同浓度5-Aza-CdR作用使A549RASSF1A mRNA表达的量与凋亡率呈正显著相关。rn 结论：(1)肺腺癌A549细胞存在着RASSF1A的表达缺失。(2)5-Aza-CdR可实现启动子去甲基化诱导肺腺癌A549细胞重新表达RASSF1A,并在一定范围内呈浓度依赖性。(3)5-Aza-CdR可抑制肺腺癌A549细胞的生长、诱导细胞凋亡,且与RASSF1A基因表达呈正相关,这提示RASSF1A重新表达可能为去甲基化剂诱导细胞凋亡的途径之一,去甲基化剂可能成为肺癌化疗的侯选用药,RASSF1A有可能作为肺癌防治的新靶点。