自噬在七氟烷预处理对缺氧复氧损伤大鼠心肌细胞延迟性保护中的作用

摘要

目的：
　　 观察七氟烷预处理延迟性保护(SWOP)对大鼠心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的影响，探讨自噬在七氟烷SWOP对WR损伤心肌细胞延迟性保护中的机制。
　　 方法：
　　 H9c2大鼠心肌细胞随机分为5组，CON组、H/R组(缺氧2 h，复氧1 h)、七氟烷预处理延迟性保护组(SWOP组，给予2.5％七氟烷SWOP1 h，间隔24 h后进行H/R)、自噬抑制剂组(3-MA组，在培养基内加入终浓度为10 mM3-MA培养1h，间隔24 h后进行H/R)、3-MA+SWOP组(2.5％七氟烷SWOP前15 min给予10mM3-MA，间隔24 h后进行H/R)。实验结束后取心肌细胞，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测凋亡率，采用透射电镜观察细胞内自噬小体和凋亡的变化，Western Blot法检测LC3-Ⅱ、Beclin1和Bcl-2的蛋白表达。
　　 结果：
　　 细胞存活率和凋亡率：与H/R组相比，SWOP组、3-MA组和3-MA+SWOP组心肌细胞存活率增加(P<0.05)，凋亡率减少(P<0.05)。
　　 电镜结果：H/R组心肌细胞内溶酶体被激活，自噬和凋亡同时存在，SWOP组自噬小体和溶酶体减少。
　　 Western blot结果：与CON组相比，H/R组和SWOP组LC3-Ⅱ、Beclin1表达上调(P<0.05)；与H/R组相比，SWOP组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白上调幅度降低(P<0.05)，SWOP组、3-MA组和3-MA+SWOP组Bcl-2表达上调(P<0.05)。
　　 结论：
　　 七氟烷SWOP可通过下调LC3-Ⅱ、Beclin1，上调Bcl-2的表达，以减少24 h后H/R损伤心肌细胞的自噬性死亡和凋亡，增加细胞存活率，从而发挥其延迟性心肌保护作用。