胃癌Ⅰ号方体外对人胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKT信号通路影响的实验研究

摘要

目的:中医药治疗因其具有与西医治疗手段联合，增强抗肿瘤效果，并减轻药物对人体正常生命活动的影响，特别是对接受手术及放化疗后，身体机能受损患者的恢复治疗、晚期胃癌病人的支持治疗，均具有较好的效果。南京中医药大学葛信国教授治疗胃癌的验方胃癌Ⅰ号方，在临床运用的过程中，具有较好的控制肿瘤生长，降低术后复发转移率，延长PFS的作用，但其作用机制尚不明确。通过在新西兰兔体内制备胃癌Ⅰ号方含药血清，研究其在体外对人胃癌细胞SGC-7901功能学上的作用，及其对细胞内PI3K/AKT信号通路的调控作用，以及对细胞内PTEN分泌水平的影响作用，探索胃癌Ⅰ号方作用机制，为胃癌综合治疗提供新的思路与方式，造福广大胃癌患者。
　　方法:体外培养胃癌细胞SGC-7901，在新西兰兔体内制备胃癌Ⅰ号方含药血清，通过设定不同浓度梯度的含药血清，作用于胃癌细胞SGC-7901特定时间后，采用CCK8法分析胃癌Ⅰ号方含药血清对胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制的效果，划痕实验测定其对细胞迁移的效果，流式细胞仪检测其对细胞周期的调控效果，Western Blot法测定胃癌Ⅰ号方含药血清对通路蛋白PTEN、Pl3K、p-AKT蛋白表达情况的作用。
　　结果:胃癌Ⅰ号方含药血清呈剂量和时间依赖性的对胃癌细胞SGC-7901产生抑制作用，具有明显的抑制增殖(p＜0.01)、抑制迁移的效果(p＜0.05)。当10％浓度胃癌Ⅰ号方含药血清作用于胃癌细胞SGC-7901后，将胃癌细胞SGC-7901阻滞在G0/G1期，阻碍细胞的有丝分裂。Western Blot检测相关通路蛋白表达情况的表明，实验组的p-AKT和PI3K的表达受到抑制，而PTEN蛋白的表达则出现上升(p＜0.01)。
　　结论:1.胃癌Ⅰ号方在体外对SGC-7901细胞具有明显的增殖和迁移抑制作用;2.胃癌Ⅰ号方能够将SGC-7901细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期;3.胃癌Ⅰ号方能够通过增加PTEN蛋白的分泌，下调PI3K/AKT信号通路，发挥抗肿瘤作用。

目录

声明

摘要

前言

第一章 理论研究

1．胃癌的西医现状与进展

1．1 定义、分类及流行病学

1．2 病因和发病机制

1．3 信号通路

2．中医学对胃癌的认识

2．1 病名

2．2 病因病机

2．3 辫证论治

2．4 中医药治疗胃癌特色

3．立项依据

第二章 实验部分

1．材料

1．1 实验动物

1．2 实验药物

1．3 细胞株

1．5 仪器与设备

2．方法

2．1 实验分组

2．2 给药方案及含药血清制备

2．3 含药血清浓度筛选

2．4 CCK8法测定细胞增殖抑制率

2．5 划痕试验测定细胞迂移情况

2．6 流式细胞仪检测细胞周期百分比

2．7 Western Blot实验测定信号通路蛋白表达情况

2．8 统计学处理

3．结果

3．1 最佳实验用含药血清浓度筛选结果

3．2 胃癌Ⅰ号方含药血清对SGC-7901的增殖抑制作用

3．3 胃癌Ⅰ号方含药血清对SGC-7901的迁移抑制作用

3．4 流式细胞仪检测细胞周期结果

3．5 胃癌Ⅰ号方含药血清影响信号通路蛋白表达结果

4．讨论

4．1 组方内单药讨论

4．2 实验结果讨论

5．问题与展望

第三章 结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的成果

致谢