单增李斯特菌inlAB天然缺失株的生物学特性及其主要毒力基因结构特征

摘要

单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称单增李斯特菌）是引起人类李斯特菌病（listeriosis）的重要食源性病原菌。目前单增李斯特菌已经受到世界各国卫生部门和食品安全部门的高度重视，被世界卫生组织列为四大食源性致病菌之一。
　　 本试验分析了115株不同来源的单增李斯特菌，从中发现了一株天然缺失inlAB基因簇的非典型单增李斯特菌S10，随后对该菌株展开了以下三方面的研究：
　　 （1）S10的生物学特性分析及毒力基因的构成：对该菌株及其他7株不同血清型的菌株进行了生化分析、谱系及血清型分析、粘附力试验、小鼠毒力试验、感染相关基因分析和多位点序列分型。结果显示菌株S10为具有典型生化特征的1/2b型单增李斯特菌，其粘附力显著低于其他菌株，却对小鼠具有一定的毒力。S10具有除inlAB外较完整的感染相关基因构成，位于谱系Ⅰ进化支的1/2b型与4b型分支间。
　　 （2）S10的inlAB邻近区域生物信息学分析：结果显示，与其他血清型菌株inlAB邻近区域结构相比，在inlAB两翼具有独特的基因结构。S10缺失lmo0431、lmo0432、lmo0435、lmo0436、lmo0437，仅扩增得到lmo00430，该基因与1/2a型菌株EGD、4b型菌株F2-365与4a型菌株HCC23的同源性分别为99.6％、94.0％与77.4％。
　　 （3）实时荧光定量PCR方法分析菌株S10的主要毒力基因表达水平的变化：利用实时荧光定量PCR技术检测了S10中内化素基因（inlA，inlB，inlC，inlC2，inlD，inlE，inlJ）转录水平的差异。结果显示，S10在天然缺失inlAB的前提下，inlC2，inlD，inlE的转录水平均极显著高于参考菌株（p<0.01），而inlC，inlJ差异不显著（p>0.05）.提示在inlAB缺失条件下，S10可能通过上调其他内化素基因的转录水平，从而有效的代偿其致病能力，进一步丰富了内化素家族对细菌感染作用的认识.
　　 综上所述，本试验研究了天然缺失inlAB的非典型单增李斯特菌S10的生物学特性、毒力基因结构及内化素基因转录水平差异，为进一步深入研究细菌的内化机制与致病基因组（Pathogenomics）进化趋势奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

引言

第一篇 文献综述

第一章 单增李斯特菌主要毒力因子

1 粘附侵袭相关毒力因子

2 胞内增殖相关毒力因子

3 毒力调控因子

4 总结

参考文献

第二章 单增李斯特菌分型技术

1 单增李斯特菌的传统表型分析法

2 单增李斯特菌的分子分型法

3 总结

参考文献

第三章 实时荧光定量PCR技术及其应用

1 实时荧光定量PCR技术简介

2 实时荧光定量PCR定量方法

3 实时荧光定量PCR技术在单增李斯特菌中的应用

4 总结

参考文献

第二篇 试验研究

第一章 天然缺失in1AB的单增李斯特菌S10生物学特性鉴定及毒力基因构成

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二章 天然缺失in1AB的单增李斯特菌S10 in1AB邻近区域特性分析

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第三章 天然缺失in1AB的单增李斯特菌S10内化素基因转录水平分析

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

致谢

硕士期间发表文章