硒和沸石及其联合对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡的保护作用

摘要

黄曲霉毒素中毒是畜禽养殖行业常见的问题，动物误食含黄曲霉毒素的饲粮后会对生产性能和繁殖性能造成不良影响，且残留在动物肌肉和组织中的毒素能够进一步对人体产生损害作用。黄曲霉毒素引起机体损伤的原因之一是它能够诱导细胞产生活性氧簇(ROS)，从而对机体产生氧化应激反应，当氧化应激作用超出机体所能承受的抗氧化能力时，便会造成损伤。沸石作为霉菌毒素吸附剂的应用早有研究，且其作用机制也已明确;硒(Selenium，Se)是机体必需的营养元素，也是一种有效的抗氧化剂，作为许多抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的组成部分，它在抗氧化应激反应中起了重要作用，Se用于缓解霉菌毒素的研究报道也有许多，但其作用机制并不清楚。研究表明，Se缺乏时会诱导胞质Nrf2解耦连后入核，启动其调控的下游Ⅱ相酶和抗氧化酶基因的表达，因而，我推测Se在黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性效应缓解过程可能与Nrf2抗氧化通路相关。主要研究结果如下:
　　1.硒和沸石对AFB1暴露肉鸡肝脏氧化损伤的保护作用
　　为了研究Se和沸石对AFB1暴露肉鸡肝脏氧化损伤的缓解作用。选取1日龄AA肉鸡150只，随机分为5个处理组:A.对照组（基础饲粮），B.AFB1组（基础饲粮+100μg/kg AFB1），C.沸石组（基础饲粮+100μg/kg AFB1+3％沸石），D.Se组(基础饲粮+100μg/kg AFB1+0.3 mg/kg Se)，E.沸石+Se组(基础饲粮+100μg/kg AFB1+3％沸石+0.3 mg/kg Se)，试验期为42 d。结果表明:AFB1组与对照组相比，肉鸡肝脏重显著降低(P＜0.05)，平均日采食量和料重比有所升高，平均日增重略有降低;血清谷草转氨酶(GOT，P＞0.05)和谷丙转氨酶(GPT，P＜0.05)活性升高;肝脏丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量显著升高(P＜0.05)，总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)水平则显著降低(P＜0.05);肝脏组织病理切片观察到多处出血位点及肝细胞坏死和萎缩。Se组与AFB1组相比，肉鸡平均采食量和料重比有所降低(P＞0.05)，肝脏重则显著增加(P＜0.05)，与对照组无显著差异(P＞0.05);血清GOT和GPT活性减弱;肝脏GSH-Px和T-SOD活性显著升高(P＜0.05)，MDA含量显著降低(P＜0.05)，三者都恢复到对照组水平，H2O2含量有所减低;肝脏损伤得到缓解。与AFB1组相比，沸石组ADFI、ADG、F/G并未得到良好改善，但3％的沸石降低了肉鸡的死淘率，显著增加了肝脏重(P＜0.05);Se与沸石联合组ADG、F/G和死淘率得到一定改善(P＞0.05)，肝脏重也显著增加(P＜0.05);沸石组、沸石+Se组GSH水平并无改善(P＞0.05)，但沸石+Se组GSH-Px和T-SOD活性显著升高(P＜0.05)，恢复到了对照水平。沸石组和沸石+Se组的GOT、GPT活性得到一定降低(P＞0.05)，但并未恢复至对照水平，三组之间差异不显著;肝脏损伤得到恢复。由此可见，Se和沸石能够缓解AFB1引起的肉鸡肝脏氧化损伤，增加肉鸡抗氧化能力，但Se和沸石联系作用效果并不好于单独使用时的效果。
　　2.硒和沸石及其联合对AFB1暴露肉鸡睾丸氧化损伤的保护作用
　　本试验旨在研究Se和沸石对AFB1暴露肉鸡睾丸氧化应激反应的缓解作用。试验分组同上文。结果表明:AFB1、Se、沸石及其联合对睾丸重和睾丸器官指数的影响差异并不显著(P＞0.05)。饲粮添加AFB1能够显著降低CAT、GSH和GSH-Px的酶活性(P＜0.05)，同时增加H2O2(P＞0.05)和MDA(P＜0.05)含量。与AFB1组相比，沸石组GSH水平恢复到对照组水平，沸石组、Se组和沸石+Se组的其他抗氧化指标有所改善，但差异并不显著(P＞0.05)。对照组睾丸组织正常，AFB1组和沸石组睾丸略有萎缩;组织形态学切片结果显示，对照组曲细精管形态完好，间质细胞和精原细胞细胞清晰，细胞核位于细胞中间，AFB1组曲细精管间的间隙有所增加，但并不明显，其他各组的睾丸形态也较为正常。由此可见，Se和沸石能够缓解AFB1引起的肉鸡睾丸氧化应激反应，从组织形态学看出，AFB1对睾丸并未产生实质性损伤。
　　3.硒对AFB1暴露肉鸡肝脏和睾丸氧化损伤保护作用的可能机制
　　本试验旨在研究Se在缓解AFB1毒性效应过程中，肝细胞和睾丸细胞内Nrf2和caspase-3表达的变化。选用1日龄AA肉鸡90只，随机分为3组:基础饲粮（对照组），基础饲粮+100μg/kg AFB1(AFB1组)，基础饲粮+100μg/kg AFB1+0.3 mg/kg Se（Se组），试验期42 d。结果表明:免疫组化和蛋白印迹分析发现转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白在肉鸡肝脏和睾丸细胞核内表达显著增加(P＜0.05)，凋亡因子caspase-3只在AFB1组细胞的胞核内表达。在100μg/kg AFB1饲粮中加入0.3 mg/kg Se能使肝细胞胞核Nrf2表达水平显著下降(P＜0.05)，Se组也并未发现caspase-3的入核表达。由此可见，Se缓解AFB1引起的肉鸡肝脏和睾丸氧化应激损伤作用可能与Nrf2抗氧化通路有关。

目录

声明

摘要

缩略词中英文对照

前言

第一章 黄曲霉毒素B1、沸石、硒及Nrf2抗氧化通路的研究进展

1 黄曲霉毒素B1概述

1．1 黄曲霉毒素B1简介

1．2 黄曲霉毒素B1对生产性能和血清学指标的影响

1．3 黄曲霉毒素B1的代谢

2 氧化应激

3 沸石和硒对黄曲霉毒素B1毒性效应的缓解作用

3．1 硒缓解黄曲霉毒素B1毒性效应的研究进展

3．2 沸石缓解黄曲霉毒素B1毒性效应的研究进展

4 硒和Nrf2抗氧化通路的研究进展

5 本研究目的与意义

参考文献

第二章 硒和沸石及其联合对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝脏氧化损伤的保护作用

1 材料与方法

1．1 试验设计

1．2 试验材料

1．3 样品采集

1．4 检测指标

1．5 数据统计

2 结果与分析

2．1 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡生产性能的影响

2．2 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝功能指标的影响

2．3 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝脏氧化和抗氧化指标的影响

2．4 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝脏组织学的影响

3 讨论

3．1 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡生产性能的影响

3．2 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝功能指标的影响

3．3 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡氧化和抗氧化指标的影响

3．4 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝脏组织学的影响

4 小结

参考文献

第三章 硒和沸石及其联合对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡睾丸氧化损伤的保护作用

1 材料与方法

1．1 试验设计

1．2 试验材料

1．3 样品采集

检测指标及方法

1．5 数据统计

2 结果与分析

2．1 硒和沸石对黄曲霉毒素B1睾丸重和睾丸器官指数的影响

2．2 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡睾丸氧化和抗氧化指标的影响

2．3 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡睾丸组织学的影响

3 讨论

3．1 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡睾丸重和睾丸器官指数的影响

3．2 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡睾丸氧化和抗氧化指标的影响

3．3 硒和沸石对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡睾丸组织学的影响

4 小结

参考文献

第四章 硒对黄曲霉毒素B1暴露肉鸡肝脏和睾丸氧化损伤保护作用的可能机制

1 材料与方法

1．1 试验设计

1．2 试验材料

1．3 样品采集

1．4 检测指标及方法

2 结果与分析

2．1 免疫组化法检测肝脏中Nrf2的表达

2．2 免疫组化法检测睾丸中Nrf2的表达

2．3 Western blot检测Nrf2和caspase-3在肝脏中的表达

2．4 Western blot检测Nrf2和caspase-3在睾丸中的表达

3 讨论

4 小结

参考文献

全文总结

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢