RabGTPases介导GOLPH3在脑胶质瘤中调节EGFR内吞循环的作用机制研究

摘要

目的：本研究在前期发现GOLPH3抑制EGFR内吞的基础上，重点探讨其放大EGFR信号通路促进胶质瘤细胞增殖的具体机制，为胶质瘤的分子靶向治疗提供潜在的靶点。
　　方法：1.在体外培养的U251胶质瘤细胞中，通过LipofectamineTM-2000分别转染GOLPH3的siRNA，应用WB、免疫荧光法检测下调GOLPH3的表达对EGFR的内吞的影响。2.U251细胞中通过CoIP检测GOLPH3是否与Rab5直接相互作用，干扰GOLPH3后，WB检测Rab5的膜蛋白及总蛋白的变化。并用GST-pulldown检测下调GOLPH3后对Rab5的活性的影响。3.在体外培养的U251胶质瘤细胞中，运用免疫荧光法在下调GOLPH3表达检测EGFR与Rab5及Rab5与EEA1的共定位。4.U251细胞中干扰GOLPH3后，同时下调Rab5，免疫荧光法检测对EGFR内吞的影响。5.在U251细胞中下调GOLPH3后WB检测Rab11的膜蛋白及总蛋白变化，免疫荧光法检测下调GOLPH3的表达对EGFR的循环的影响及EGFR与Rab11的共定位情况。
　　结果：1.在胶质瘤细胞中，荧光示下调GOLPH3能够促进EGFR的内吞，并用EGF刺激5min，EGFR的膜蛋白水平均显著降低（P＜0.01）。2.CoIP检测GOLPH3与Rab5直接相互作用，干扰GOLPH3后，WB检测Rab5的膜蛋白显著降低(P＜0.01)并总蛋白的变化不明显(P＞0.05)。并用GST-pulldown检测下调GOLPH3后明显的增加Rab5的活性量(P＜0.01)。3.下调GOLPH3表达后，EGF刺激5min，其EGFR与Rab5及Rab5与EEA1的共定位均明显增加（P＜0.05）。4.U251细胞中干扰GOLPH3后，同时下调Rab5，免疫荧光法示明显的抑制了EGFR的内吞。5.在U251细胞中下调GOLPH3后WB检测Rab11的膜蛋白明显减少(P＜0.05)，免疫荧光法检测下调GOLPH3的表达明显抑制EGFR的循环及EGFR与Rab11的共定位的量（P＜0.05）。
　　结论：1.GOLPH3对调节EGFR的内吞，可能是通过与Rab5相互作用进而抑制了Rab5的活性来调节的;2.GOLPH3可能增强了Rab11的活性进而促进了EGFR的受体循环。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2．方法

结果

讨论

结论

参考文献

RabGTPases和肿瘤 综述

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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