中药及其相关产品中多种真菌毒素同步检测研究

摘要

中药中真菌毒素污染和残留已给人类带来严重的安全隐患，世界各国对此已逐步加强重视。但是，中药基质的复杂性在一定程度上制约了痕量真菌毒检测的发展，分析方法仍不能满足对中药中真菌毒素的全面筛查。所以，有必要开发简单、快速、灵敏的多种真菌毒素同时检测的分析方法，以保证中药的质量及其用药安全。主要研究内容如下：
　　（1）超高效液相色谱-质谱（UFLC-MS/MS）法同时检测山药及山药相关产品中8种真菌毒素的污染水平。
　　通过对样品的提取溶剂、提取方法及色谱、质谱条件的优化，建立了同时检测山药及市售山药相关产品中黄曲霉毒素（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）、赭曲霉毒素A（OTA）、伏马菌素（FB1、FB2）和玉米赤霉烯酮（ZEA）等8种真菌毒素污染水平的UFLC-MS/MS方法，并用于实际样品的检测。结果表明，8种真菌毒素在各自的线性范围内线性关系良好，相关系数（R2）为0.9977~0.9999，检测限为0.025~0.125 ng/mL，定量限为0.1~0.25 ng/mL，平均回收率均在71.0~106.0％之间。在实际样品检测的实验过程中发现5份阳性样品，不同程度的污染了AFB1、FB1和 FB2，其中2份样品中的AFB1超过限量标准，但所有的样品中均未检测到OTA和ZEA。
　　（2）采用TC-M160真菌毒素多功能净化柱（MFC）结合高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光检测法（HPLC-PCD-FLD）同时测定白芍中4种黄曲霉毒素的残留量，并以UFLC-MS/MS对阳性样品进行确证。
　　通过对样品提取溶剂和多功能净化柱的类型及色谱条的优化，建立了同时检测白芍中4种黄曲霉毒素（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）污染水平的HPLC-PCD-FLD方法，并用于实际样品的检测。结果表明，4种黄曲霉毒素在各自的线性范围内线性关系良好，相关系数（R2）为0.9993~0.9999，检测限为0.03~0.18μg/kg，定量限为0.09~0.5μg/kg，平均加样回收率为80.49~100.41%。样品检测结果显示有3批药材被污染黄曲霉毒素，其中1批药材中污染了4种黄曲霉毒素，污染较为严重。以UFLC-MS/MS方法确证阳性样品，结果证明该方法无假阳性。
　　（3）建立免疫磁珠（IMBs）富集净化结合超高效液相色谱-荧光检测法（UPLC-FLD）法快速测定山药中黄曲霉毒素B1（AFB1）。
　　通过优化免疫磁球的制备过程、净化条件及液相色谱条件，建立了快速测定山药中AFB1的免疫磁珠富集净化-UPLC-FLD方法，并用于实际样品的检测。结果表明，免疫磁珠净化的最佳条件为：20%甲醇作为免疫磁珠富集体系，室温条件下吸附富集时间为30 min，以1 mL纯甲醇为洗脱溶液，洗脱3次，每次反应时间为3 min。UPLC-FLD检测时，AFB1具有良好的线性关系，相关系数R2=0.9993，检测限和定量限分别为0.3μg/kg和1.0μg/kg，回收率可达84%以上。实际样品检测发现2批污染AFB1的样品，其中1批样品污染超过限量标准，以UFLC-MS/MS方法确证阳性样品，结果证明该方法无假阳性。该研究为山药中黄曲霉毒素的快速定性定量检测提供了简便、可靠的净化及检测方法。

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第一章 绪 论

1.1 真菌毒素概述

1.2 中药材中真菌毒素的研究概况

1.3 本课题的立题背景和意义

1.4 技术路线图及研究内容

第二章 UFLC-MS/MS法同时检测山药及相关产品中8种真菌毒素的污染水平

2.1 引言

2.2 仪器与材料

2.3 实验方法

2.4 结果与讨论

2.5 本章小结

第三章 高效液相色谱-柱后光化学衍生-荧光检测法同时检测白芍中4种黄曲霉毒素

3.1 引言

3.2 仪器与材料

3.3 实验方法

3.4 结果与讨论

3.5 本章小结

第四章 免疫磁球净化-超高效液相色谱-荧光检测法快速检测山药中黄曲霉毒素B1

4.1 引言

4.2 仪器与材料

4.3 实验方法

4.4 结果与讨论

4.5 本章小结

第五章 全文总结与展望

5.1 研究总结

5.2 工作展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文