细胞周期相关蛋白ZYG11A促进肺腺癌恶性进展的机制研究

摘要

本文通过以下几个部分展开论述：
　　第一部分:ZYG11A在非小细胞肺癌中被识别为一个潜在的癌基因
　　目的:肺癌目前是全世界最流行的肿瘤，每年造成大量患者死亡。即使患者接受了规范化治疗，在大多数国家里五年生存率仍然小于15％。因此寻找肺癌相关标记物和治疗靶点显得尤为重要。近年来随着高通量测序技术的发展与普及，以及许多公开肿瘤学数据库的涌现，使得这项工作显得更为方便简单。
　　方法:通过使用TCGA的肺癌，肺腺癌，肺鳞癌数据库从约20000个基因中筛选差异表达最大的基因。对于肿瘤和瘤旁差异表达大于5倍的和肿瘤中表达大于3的基因再进行文献阅读筛选。之后使用The Human Protein Atlas评估筛选出来的基因在组织中蛋白表达情况。
　　结果:通过TCGA数据库的筛选，我们一共识别出了7个符合条件的基因，通过在PubMed和谷歌学术上检索我们发现PITX2，HOXC13和BARX1都属于转录因子，并且在肿瘤中已经被很好的研究过了。DLL3作为一个Notch的配体在肿瘤中也被研究过了。LOC100131726是一个长链非编码RNA。IL1F5属于白介素1家族在牛皮癣的发病中被广泛研究。只有ZYG11A目前被研究甚少。
　　第二部分:ZYG11A在非小细胞肺癌中的体内外功能实验和相关机制探索
　　目的:根据之前的分析，ZYG11A可能是一个潜在的癌基因，本研究旨在探索ZYG11A和非小细胞肺癌相关恶性表型的关系及其可能机制，为肺癌防治提供潜在新靶点。
　　方法:首先使用qRT-PCR和Western blot检测ZYG11A在各个细胞中的表达情况，并选择合适的细胞系进一步进行相关表型研究。我们选择H1299和SPC-A-1进行了相关的体内外表型研究。设计特异性siRNA干扰ZYG11A的表达，之后检测细胞的增殖，迁移，侵袭能力，以及凋亡情况和细胞周期分布。
　　结果:我们发现在体内外干扰ZYG11A的表达可以显著的抑制肿瘤细胞的相关恶性表型，影响到CCNE1的表达，从而导致肿瘤细胞的G1期阻滞，我们通过拯救试验过表达CCNE1可以恢复肿瘤的相关恶性表型。
　　第三部分:ZYG11A在非小细胞肺癌中的预后价值
　　目的:探索ZYG11A在肺癌中是否可以作为一个独立的预后因素，并且探索ZYG11A和其他临床参数之间的相关性。
　　方法:我们使用了90对来自于上海芯超公司的非小细胞肺癌组织芯片进行ZYG11A的免疫组织化学染色。染色后对染色结果进行评分，然后运用相关的统计学方法探索ZYG11A的表达和患者预后及临床参数之间的关系。
　　结果:我们发现在肺癌组织中ZYG11A的表达明显高于瘤旁正常组织的表达，和更高级别的T分期和TNM分期相关;并且可以作为一个独立的预后因素。

目录

声明

摘要

第一部分：ZYG11A在非小细胞肺癌中被识别为一个潜在的癌基因

材料与方法

TCGA数据的下载和使用

组织标本

主要试剂

引物设计

Trizol提取组织总RNA

RNA的逆转录

qRT-PCR反应(实时荧光定量聚合酶链式反应)

统计学分析

结果

生物信息学分析提示ZYG11A有可能作为一个潜在的癌基因

ZYG11A的mRNA相对于瘤旁组织在肿瘤中高表达并且和临床特征相关

讨论

结论

第二部分：ZYG11A在非小细胞肺癌中的体内外功能实验和相关机制探索

材料与方法

细胞株与培养基

主要试剂

主要仪器

细胞表型试验试剂与耗材

培养基的配置方法

其他溶液配置方法

实验仪器与耗材

实验方法

结果

在体外干扰ZYG11A的表达抑制了肿瘤细胞表型并且导致了G1-s阻滞

在体内干扰ZYG11A的表达影响了细胞相关表型

ZYG11A可以影响NSCLC细胞中Cyclin E1的表达从而导致细胞发生G1期阻滞

拯救试验

讨论

结论

第三部分：ZYG11A在非小细胞肺癌中的预后价值

材料与方法

TMA组织芯片来源

TMA免疫组化染色

统计学分析

结果

ZYG11A可以作为一个独立的预后因素

讨论

结论

参考文献

文献综述

攻读学位期伺发表文章情况

致谢