MEK/ERK抑制剂U0126对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖、迁移及侵袭的影响

摘要

目的:探讨U0126对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。
　　方法:将不同浓度MEK/ERK抑制剂U0126（25、50、100μmol/L）处理Tca8113细胞24h、48h、72h后，MTT法检测其对细胞增殖的抑制情况;划痕实验和Transwell实验检测其对细胞迁移和侵袭能力的影响;细胞免疫荧光染色和Western blot法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、MEKK1、p-MEKK1在细胞内定位及蛋白的表达;Western blot法检测细胞中上皮-间质转化相关蛋白E-cadherin及vimentin的表达。
　　结果:1.MTT检测结果示，25、50和100μmol/L U0126刺激细胞24、48、72h后，与对照组比较对细胞增殖均具有明显的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05）;U0126作用细胞24、48和72h时，50和100μmol/L组与25μmol/L组比较对细胞增殖均具有明显的抑制（P＜0.01或P＜0.05）;U0126处理细胞24、48和72h时，100μmol/L组与50μmol/L组比较对细胞增殖的抑制显著（P＜0.01）;表现出浓度依赖性。25、50和100μmol/L U0126刺激细胞后，48和72h组与24h组比较对细胞增殖具有明显的抑制（P＜0.01）;72h与48h组比较对细胞增殖的抑制作用显著(P＜0.01);表现出的时间依赖性。
　　2.划痕实验结果示，25、50、100μmol/LU0126刺激Tca8113细胞24、48、72h后，细胞向划痕内迁移的距离与对照组比较受到明显抑制（P＜0.01）。
　　3.Transwell检测结果显示，25、50、100μmol/LU0126处理Tca8113细胞48h后，与对照组比较，自上室侵袭穿过基质胶进入下室的细胞数目减少，相对侵袭率分别为79％、51％、35％(P＜0.01)，表现出浓度依赖性。
　　4.免疫荧光检测显示，MEKK1主要定位在细胞质，p-MEKK1主要定位于细胞质和细胞核膜，ERK1/2定位在细胞质和核膜，p-ERK1/2主要定位在细胞核膜和核内;25、50、100μmol/LU0126处理Tca8113细胞48h后，随着药物浓度的增加，进入细胞核内p-ERK1/2的荧光密度逐渐降低，呈现出浓度依赖性，而ERK1/2、p-MEKK1、MEKK1的荧光密度没有明显变化。
　　5.Western blot实验显示:25、50、100μmol/LU0126处理Tca8113细胞48h后，与对照组比较，U0126对p-ERK1/2蛋白表达明显抑制(P＜0.01);而对ERK1/2、p-MEKK1、MEKK1蛋白表达没有明显抑制作用。
　　6.Western blot实验显示:25、50、100μmol/LU0126处理Tca8113细胞48h后，与对照组比较E-cadherin蛋白表达明显增强(P＜0.01)，而Vimentin蛋白表达明显减弱(P＜0.01)，均呈现浓度依赖性。
　　结论:1.U0126明显抑制人舌癌Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
　　2.其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化的激活，阻断MAPK/ERK信号通路有关。
　　3.其机制可能与增加E-Cadherin表达和减少Vimentin的表达，抑制上皮间充质转化有关。ERK1/2信号传导通路可能是一个潜在的人类舌鳞癌的新的治疗靶点。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

第一章 前言

2．1 细胞株

2．2 药品与试剂

2．3 主要实验仪器及设备

2．4 试剂的配制方法

2．5 实验方法

2．5．1 细胞培养-绘制生长曲线

2．5．2 细胞计数

2．5．3 细胞增殖检测-MTT实验

2．5．4 细胞划痕实验

2．5．5 Transwell侵袭试验

2．5．6 细胞免疫荧光染色

2．5．6 细胞蛋白印迹(Western Blotting)

2．6 统计学处理

第三章 结果

3．1 U0126对Tca8113细胞增殖的影响

3．2 U0126对Tca8113细胞向划痕内迁移的影响

3．3 U0126对Tca8113细胞侵袭能力的影响

3．4 细胞免疫荧光染色法检测ERK1／2、p-ERK1／2、MEKK1、p-MEKK1蛋白在细胞内的定位

3．5 Western Blotting

3．5．1 检测U0126对MEKK1、ERK1／2的影响

3．5．2 检测U0126对EMT相关蛋白Vimentin和E-cadherin表达的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 Ras／Raf／MEK／ERK信号通路及EMT在肿瘤中的研究进展

致谢