毛细管电泳在非甾体药物与牛血清白蛋白相互作用中的应用

摘要

血清白蛋白是血浆中含量最为丰富的蛋白质，它作为许多内源性和外源性化合物(特别是药物)的存储和转运蛋白，可以与许多化合物分子发生相互作用。药物与蛋白质结合是控制药物向受体释放、避免药物迅速代谢的主要途径。因此研究药物与血清白蛋白的相互作用，对了解药物在人体内的吸收、分布、药理活性和毒性都有十分重要的意义。 毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)是一种以高压电场为驱动力，毛细管为分离通道，根据样品中各组分之间的迁移速率不同而实现分离的一类液相分离技术，其具有分离效率高、分析速度快、样品用量少等特点，是研究生物分子相互作用的有力工具。 基于此，本文利用毛细管电泳对非甾体药物与牛血清白蛋白的相互作用进行研究。论文的具体内容包括： 1. 应用亲和毛细管电泳方法(affinity capillary electrophoresis，ACE)，研究了双氯芬酸钠与牛血清白蛋白的亲和作用，测得了两者作用的结合常数(1.9×105(mol/L)-1和2.4×104(mol/L)-1)。同时以荧光方法验证了电泳方法的可靠性和准确性。 2. 采用亲和毛细管电泳方法，测得了布洛芬、水杨酸同牛血清蛋白相互作用的结合常数分别为2.20×106(mol/L)-1，9.05×104(mol/L)-1；3.89×104(mol/L)-1。同时基于竞争原理，研究了布洛芬与水杨酸之间的竞争作用。 3. 毛细管电泳方法与表面等离子体方法(surface plasmonresonance，SPR)联用来研究脂烯酰基酰基载体蛋白还原酶Ⅰ(FabI)与抗菌剂三氯生的相互作用。用胶束毛细管电泳方法分析SPR回收液的药物成分，实验结果表明最佳分离条件为：缓冲组成为60mmol/L硼砂缓冲溶液+20mmol/L的SDS，pH值为9.0，分离电压为24kV，毛细管内径选择75μm。实验中检测到回收液中存在药物三氯生。

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第一章绪论

1.1生物大分子与小分子相互作用

1.2相互作用体系的分类

1.3相互作用分析的常用方法

1.4毛细管电泳方法

1.4.1 CE的发展历史

1.4.2 CE的基本原理

1.4.3 CE的分离模式

1.4.4 CE的检测器

1.4.5 CE的进样方式与样品富集

1.4.6 CE的柱技术

1.5亲和毛细管电泳

1.5.1亲和毛细管电泳测定结合常数(Kb)的方法

1.6 CE的应用与发展前景

1.6.1 CE的应用

1.6.2 CE未来的发展方向

1.7本论文研究的背景与意义

第二章双氯芬酸钠与牛血清蛋白的相互作用的研究

2.1引言

2.1.1牛血清白蛋白

2.1.2非甾体药物

2.2试剂与方法

2.2.1试剂

2.2.2样品溶液的制备

2.2.3荧光(Fluorescence spectrophotometer)方法

2.2.4 CE的实验方法

2.3结果和讨论

2.3.1电泳缓冲溶液中添加物的选择

2.3.2样品和缓冲溶液添加物浓度的选择

2.3.3 ACE测定DFS/BSA的结合常数

2.3.4荧光光谱法对DFS与BSA的亲和研究

2.3.5 ACE与荧光以及其它技术的比较

2.4 小结

第三章布洛芬与水杨酸同牛血清蛋白的竞争作用的研究

3.1引言

3.2仪器与试剂

3.3实验条件的选择

3.3.1缓冲溶液的选择

3.3.2电渗流标记物的选择

3.3.3检测方法选择

3.3.4分离电压的选择

3.3.5电泳温度的选择

3.3.6毛细管的选择

3.4结果和讨论

3.4.1电泳缓冲溶液中添加物的选择

3.4.2样品和缓冲溶液中添加物浓度的选择

3.4.3 ACE测定Ibu/BSA、Sal/BSA的结合常数

3.4.4 Ibu和Sal同BSA反应的竞争研究

3.5 小结

第四章CE与SPR联用研究蛋白质与抗菌剂的相互作用-对SPR回收液的分析研究

4.1引言

4.2实验部分

4.2.1试剂

4.2.2缓冲溶液和试剂的配置

4.2.3 CE测试的条件

4.3结果和讨论

4.3.1样品的CE分析

4.3.2 SPR回收液的CE分析

4.4 小结

第五章结论与展望

5.1结论

5.2存在的问题与展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间主要的研究成果