HER-2/neu在人膀胱癌组织的表达及其siRNA对膀胱癌细胞生物学行为的影响

摘要

膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的肿瘤，在全世界范围内膀胱肿瘤的发病率在男性占全身肿瘤的第8位，标准发病率在男性为9.9/10万，在女性为第25位，标准发病率2.3/10万。在我国膀胱肿瘤也是泌尿外科最常见的肿瘤，膀胱移行细胞癌(BTCC)是最常见的膀胱恶性肿瘤，占其中的92.8％。膀胱肿瘤的产生、浸润、转移和复发是一个多阶段复杂的过程，与许多癌基因的激活有关。超过50％的癌基因、原癌基因产物都具有酪氨酸激酶(RTK)活性，RTK类癌基因，包括HER-1(EGFR)、HER-2/neu、HER-3、HER-4等，HER-2/neu起核心作用。HER-2/neu的活化信号可以转导下游分子，介导多种生化反应，产生广泛的生物学效应，在细胞的增殖、分化、抗凋亡等过程中起重要作用。HER-2/neu过表达与多种肿瘤的发生发展、化疗耐受、放疗抵抗等相关。HER-2/neu基因在膀胱肿瘤的发生、发展中扮演何种角色仍不十分清楚。国内外现在仍未见HER-2/neu的小干扰RNA(siRNA)转染BTCC细胞系的实验研究报道。实验首次使用siRNA抑制膀胱癌细胞株T24中HER-2/neu基因的表达，研究HER-2/neu在膀胱癌发生、发展中的作用，探讨膀胱癌基因治疗的新途径。 目的：从mRNA和蛋白水平研究癌基因HER-2/neu在BTCC及正常膀胱粘膜组织中的表达，结合临床病理特征研究HER-2/neu在BTCC发生发展中的作用。 方法：采用RT-PCR和免疫组化从mRNA和蛋白水平检测BTCC及正常膀胱粘膜组织中HER-2/neu的表达，分析HER-2/neu表达与肿瘤发生、肿瘤临床分期、病理分级的关系。 结果：BTCC中HER-2/neu mRNA表达率为57.1％，较正常膀胱粘膜组织(表达率5.0％)明显升高。随着临床分期、病理分期的升高，HER-2/neu mRNA在BTCC表达量增多。BTCC中HER-2/neu蛋白阳性率为43.1％，较正常膀胱粘膜组织(阳性率5.0％)明显升高。HER-2/neu蛋白在中低分化(Ⅱ、Ⅲ)BTCC中的阳性率明显高于高分化(I)BTCC。HER-2/neu蛋白在浸润性(T2-T4)BTCC中的阳性率明显高于表浅性(Tis-T1)BTCC。随着病理分期的升高，HER-2/neu蛋白在BTCC阳性率增多。HER-2/neu蛋白、PCNA蛋白在BTCC中表达为正相关性，相关系数为0.336。以上差异均有显著性。BTCC中HER-2/neu mRNA、HER-2/neu蛋白表达与性别、年龄、初复发、单多发、复发前是否灌注治疗等因素无关。 结论：HER-2/neu mRNA、HER-2/neu蛋白均在BTCC中表达异常增强，在BTCC发生、发展过程中起重要作用。HER-2/neu可作为诊断、判断预后、指导治疗、随访检测的指标。HER-2/neu基因可能成为BTCC新的治疗靶点。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一章人膀胱移行细胞癌组织中HER2/neu表达的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

附图

第二章针对HER-2/neu基因的siRNA表达载体的构建及鉴定

1材料与方法

2结果

3讨论

附图

附录

第三章RNA干扰抑制膀胱癌细胞株T24中HER-2/neu的表达

1实验分组和技术路线

实验一：构建稳定表达重组质粒的细胞株

实验二：目的基因沉默效果的检测

2结果

3讨论

附图

第四章siRNA干扰HER-2/neu的表达对膀胱癌细胞T24生物学行为的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

附图

全文总结

参考文献

综述一 HER-2/neu的研究进展及其与泌尿系统肿瘤的关系

综述二 RNA干扰与泌尿系统肿瘤的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文