Eg5、PCNA在人膀胱癌组织的表达及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响

摘要

【背景与目的】
　　在我国,膀胱癌发病率居男性泌尿系统肿瘤第一位,死亡率居第二位,其中绝大多数为膀胱移行细胞癌,由于具有复发性、侵袭性、产生获得性耐药等特点,其治疗效果常不理想。所以寻找与膀胱癌恶性生物学行为密切相关的生物学标记,并根据其生物学特点利用合理而及时的治疗方法,提高膀胱癌患者的总体生存率,一直是临床医生研究的重要课题之一。
　　纺锤体驱动蛋白Eg5是驱动蛋白超家族中成员之一,是有丝分裂的关键蛋白,参与细胞增殖。有学者研究表明人类多种恶性肿瘤(例如肾癌、胰腺癌)组织中
　　存在Eg5表达失控,其高表达被认为与肿瘤的发生发展密切相关。PCNA是与细胞增殖周期有关的蛋白,能客观评估肿瘤细胞生物学活性和所处的生长状态,而处于静止状态的细胞PCNA呈阴性表达,因此PCNA被用来作为肿瘤增殖的标志。
　　Eg5参与肿瘤细胞增殖,在膀胱癌中研究少见,而PCNA是最常使用的肿瘤细胞增殖的标志,广泛应用于评估肿瘤增殖能力,二者在膀胱移行细胞癌之间的相关性尚未见报道,二者是否具有协同促进肿瘤细胞增殖作用,其预后价值是否具有实用价值等都有待进一步证实。鉴于此,本研究运用免疫组化法检测 Eg5和PCNA在膀胱移行细胞癌中的表达情况,对二者间相关性进行初步研究,旨在了解其在膀胱肿瘤发生、发展中的作用及临床意义;利用siRNA干扰T24细胞中Eg5蛋白表达,探讨其对T24细胞生物行为的影响。
　　【方法】
　　1.本实验收集12例正常膀胱黏膜组织和44例外科手术切除膀胱癌标本,应用免疫组化SP法检测不同临床分期及病理分级的BTCC标本和正常膀胱黏膜组织中Eg5和PCNA表达情况,并对两者表达情况与BTCC临床分期、病理分级及预后情况、两者在BTCC中表达有无相关性进行了统计分析。
　　2.化学合成针对Eg5的小干扰RNA,通过脂质体转染至T24细胞中,应用Western blot法检测转染后T24细胞中Eg5蛋白表达,采用台盼蓝拒染实验检测细胞死亡率,用噻唑蓝(MTT)比色分析法和平板克隆形成实验检测细胞增殖抑制率,通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。
　　【结果】
　　1.Eg5和PCNA在BTCC中的阳性率分别为81.8％和77.3%,二者表达与患者的临床分期、病理分级、生存率等有相关性(P<0.05),BTCC中 Eg5、PCNA蛋白表达呈正相关(r=0.447)。
　　2.siRNA干扰可降低Eg5蛋白表达;台盼蓝实验提示,干扰组细胞死亡显著高于空白对照组及阴性对照组,干扰组的克隆形成率下降,与空白对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义;MTT结果提示,干扰Eg5基因表达后,T24细胞的增殖率明显下降;划痕实验结果显示干扰组细胞迁移能力受到明显抑制(P<0.05)
　　【结论】
　　1.Eg5、PCNA在BTCC组织中高表达,且与BTCC的临床及病理学分期分级密切相关,在膀胱癌发生、发展中起重要作用,可作为判断预后的指标。
　　2.Eg5基因在膀胱移行细胞癌起重要作用,干扰Eg5基因能有效抑制T24细胞的增殖与迁移,加速细胞死亡,Eg5有望成为膀胱癌基因治疗的新靶点。

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引言

第一部分 膀胱移行细胞癌中Eg5和PCNA的表达及其临床意义

1 材料及设备

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二部分Eg5基因对膀胱癌T24细胞增殖和迁移的影响

1 材料及设备

2 实验方法

3 结果

第三部分 结论

参考文献

附录

致谢

综述