PRRT2相关发作性疾病致病基因PRRT2突变分析

摘要

背景:富含脯氨酸的跨膜蛋白2基因（PRRT2）编码340个氨基酸，产物为富含脯氨酸的跨膜蛋白，其功能目前尚不清楚。2011年Wang，Chen等率先在发作性运动诱发性运动障碍(PKD)中发现了该基因致病突变。随后的研究发现PRRT2基因也是良性家族性婴儿惊厥(BFIS)和婴儿惊厥伴发作性手足舞蹈徐动征(ICCA)的主要致病基因。到目前为止，国内外的研究发现了50余种PRRT2点突变，然而仍有一部分典型的PKD，BFIS，ICCA患者未检测出PRRT2点突变，提示可能为缺失突变等非常规突变或其他基因突变所致。另外，在癫痫等多种神经系统发作性疾病中也有PRRT2致病突变报道，PRRT2是否为癫痫的致病基因仍不明确，需要进一步研究证实。
　　目的:对PKD，BFIS，ICCA家系及散发患者进行PRRT2点突变及缺失突变的筛查，建立了PKD，BFIS，ICCA基因诊断流程;对热性惊厥(FS)及特发性婴幼儿癫痫患者进行PRRT2点突变筛查，扩展PRRT2相关发作性疾病的疾病谱。
　　方法:本研究共纳入12个PKD/ICCA家系，22个PKD/ICCA散发患者;3个BFIS/ICCA家系，28个BIS散发患者;3个FS家系，26个FS散发患者及202个特发性婴幼儿癫痫患者。利用直接测序法，对PKD，BFIS，ICCA家系及散发患者PRRT2基因的所有编码区外显子及外显子/内含子交界区序列进行点突变筛查。然后使用实时荧光定量PCR(qPCR)对未发现点突变的PKD，BFIS，ICCA患者行PRRT2缺失突变筛查。利用直接测序法，对特发性婴幼儿癫痫患者PRRT2基因的所有编码区外显子及外显子/内含子交界区序列进行点突变筛查。
　　结果:本研究在8个PKD/ICCA家系、5个PKD/ICCA散发患者中筛查出c.649dupC(p.Arg217ProfsX8)及c.649delC(p.Arg217GlufsX12)两种已知点突变，2个PKD/ICCA散发患者中筛查出2种序列变异（c.383C＞T和c.412C＞G），3个PKD/ICCA家系、7个PKD/ICCA散发患者中筛查出PRRT2杂合缺失突变;在3个BFIS/ICCA家系、2个BIS散发患者中筛查出c.649dupC(p.Arg217ProfsX8)及c.629dupC(p.Ala211SerfsX14)两种已知点突变，2个BIS散发患者中筛查出PRRT2杂合缺失突变;在1个FS散发患者中筛查出c.649dupC(p.Arg217ProfsX8)已知点突变。
　　结论:1.PRRT2是PKD，BFIS，ICCA的主要致病基因，该基因的杂合缺失可能是PKD，BFIS的致病原因
　　2.发现PRRT2新的致病点突变c.383C＞T(p.Ser128Phe)
　　3.PRRT2可能是热性惊厥的致病基因，可能不是特发性婴幼儿癫痫的常见致病基因。

目录

声明

论文说明

摘要

注释说明汇集表

第一章 前言

第二章 研究对象和方法

2．1 研究对象

2．2 主要试剂、耗材及其配制与规格

2．2．1 主要试剂、耗材与规格

2．2．2 试剂配制

2．2．3 主要仪器使用

2．3 主要使用的数据库及软件

2．4 实验方法

2．4．1 血液标本采集(提取gDNA)

2．4．2 gDNA的制备与测定

2．4．3 聚合酶链式反应(PCR)

2．4．4 6％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的PCR产物

2．4．5 PCR产物测序

2．4．6 序列分析

2．4．7 实时荧光定量PCR

第三章 实验结果

3．1 目的基因PRRT2 5对荧光定量PCR引物溶解曲线及标准曲线

3．2 家族及散发性PKD／ICCA患者临床资料及PRRT2突变筛查结果

3．2．1 家族及散发性PKD／ICCA患者PRRT2点突变筛查结果

3．2．2 家族及散发性PKD／ICCA患者PRRT2缺失突变筛查结果

3．3 家族性BFIS／ICCA及散发性BIS患者临床资料及PRRT2突变筛查结果

3．3．1 家族BFIS／ICCA及散发性BIS患者PRRT2点突变筛查结果

3．3．2 散发BIS患者PRRT2基因缺失突变筛查结果

3．4 FS及特发性婴幼儿癫痫患者PRRT2点突变筛查结果

3．4．1 FS散发患者临床表现及PRRT2点突变筛查结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 PRRT2相关发作性疾病

攻读学位期间主要的研究成果

致谢